Différence entre le microscope à fluorescence et le microscope confocal laser
microscope fluorescent
1. Le microscope à fluorescence utilise la lumière ultraviolette comme source de lumière, qui est utilisée pour irradier l'objet détecté afin de le faire émettre de la fluorescence, puis observer la forme et la position de l'objet sous le microscope. Le microscope à fluorescence est utilisé pour étudier l'absorption, le transport, la distribution et la localisation des substances chimiques dans les cellules. Certaines substances présentes dans les cellules, comme la chlorophylle, peuvent devenir fluorescentes après avoir été irradiées par des rayons ultraviolets ; D'autres substances ne peuvent pas émettre de fluorescence par elles-mêmes, mais elles peuvent le faire après avoir été teintes avec des colorants fluorescents ou des anticorps fluorescents et irradiées par des rayons ultraviolets. Le microscope à fluorescence est l'un des outils de recherche qualitative et quantitative sur ces substances.
2, principe du microscope à fluorescence :
(a) Source lumineuse : La source lumineuse émet une lumière de différentes longueurs d’onde (de l’ultraviolet à l’infrarouge).
(b) Source de lumière à filtre d'excitation : transmettant la lumière avec une longueur d'onde spécifique qui peut rendre l'échantillon fluorescent, tout en bloquant la lumière inutile pour la fluorescence d'excitation.
(c) Échantillons fluorescents : généralement colorés avec des pigments fluorescents.
(d) Filtre de blocage : bloque la lumière d'excitation non absorbée par l'échantillon pour transmettre sélectivement la fluorescence, et certaines longueurs d'onde de la fluorescence sont également transmises sélectivement. Un microscope qui utilise la lumière ultraviolette comme source de lumière pour faire émettre de la fluorescence à l'objet irradié. Le microscope électronique a été assemblé pour la première fois par Knohl et Ha Roska à Berlin en 1931. Ce microscope utilise un faisceau d'électrons à grande vitesse au lieu d'un faisceau lumineux. Étant donné que la longueur d'onde du flux électronique est beaucoup plus courte que celle de l'onde lumineuse, le grossissement du microscope électronique peut atteindre 8 0 0 000 fois et la limite de résolution minimale est de 0,2 nanomètre. Le microscope électronique à balayage, utilisé depuis 1963, permet aux gens de voir les minuscules structures à la surface des objets.
3. Champ d'application : utilisé pour agrandir l'image de petits objets. Elle est généralement appliquée à l'observation de la biologie, de la médecine et des particules microscopiques.
Microscope confocal
1. Le microscope confocal ajoute une semi-lentille semi-réfléchissante sur le chemin optique de la lumière réfléchie, qui réfracte la lumière réfléchie qui a traversé la lentille vers d'autres directions. À son foyer se trouve un déflecteur avec un trou d'épingle, et le trou d'épingle est situé au foyer. Derrière le déflecteur se trouve un tube photomultiplicateur. On peut imaginer que la lumière réfléchie avant et après la focalisation de la lumière de détection traverse ce système confocal et ne sera pas focalisée sur le petit trou, mais sera bloquée par le déflecteur. Le photomètre mesure donc l’intensité de la lumière réfléchie au foyer.
2. Principe : Le microscope optique traditionnel utilise la source de lumière de champ, et l'image de chaque point de l'échantillon sera perturbée par la diffraction ou la lumière diffusée des points adjacents ; Le microscope confocal à balayage laser scanne chaque point du plan focal de l'échantillon en utilisant la source de lumière ponctuelle formée par le faisceau laser traversant le sténopé d'éclairage. Le point irradié sur l'échantillon est imagé au niveau du trou d'épingle de détection, qui est reçu point par point ou ligne par point par un tube photomultiplicateur (PMT) ou un dispositif couplé à froid (cCCD) après avoir détecté le trou d'épingle, et une image fluorescente se forme rapidement sur l’écran du moniteur d’ordinateur. Le sténopé d'éclairage et le sténopé de détection sont conjugués par rapport au plan focal de l'objectif, et les points sur le plan focal se concentrent sur le sténopé d'éclairage et le sténopé d'émission en même temps, et les points en dehors du plan focal ne le seront pas. être imagée au niveau du trou d'épingle de détection, de sorte que l'image confocale obtenue soit la section transversale optique de l'échantillon, ce qui surmonte le défaut d'image floue du microscope commun.
3. Domaines d'application : impliquant la médecine, la recherche animale et végétale, la biochimie, la bactériologie, la biologie cellulaire, les tissus et les embryons, la science alimentaire, la génétique, la pharmacologie, la physiologie, l'optique, la pathologie, la botanique, les neurosciences, la biologie marine, la science des matériaux, la science électronique, mécanique, géologie pétrolière et minéralogie.
