Avantages avancés des microscopes multiphotoniques à balayage laser
Le microscope multiphotonique à balayage laser est une amélioration significative de la microscopie optique, qui se manifeste principalement par la capacité d'observer des structures profondes de cellules vivantes, de cellules fixes et de tissus, et d'obtenir des structures planes multi-couches Z-claires et nettes, à savoir des tranches optiques, qui peuvent être utilisées pour construire des structures solides tridimensionnelles-d'échantillons. Le microscope confocal utilise une source de lumière laser, qui est étendue pour remplir tout le plan focal de l'objectif, puis converge vers de très petits points sur le plan focal de l'échantillon à travers le système de lentilles de l'objectif. Selon l'ouverture numérique de l'objectif, le diamètre du point d'éclairage le plus brillant est d'environ 0,25-0,8 μm et la profondeur est d'environ 0,5-1,5 μm. La taille du point confocal est déterminée par la conception du microscope, la longueur d'onde du laser, les caractéristiques de l'objectif, les paramètres d'état de l'unité de numérisation et les propriétés de l'échantillon. La plage d'éclairage et la profondeur d'un microscope de champ sont grandes, tandis que l'éclairage d'un microscope confocal est concentré sur un point focal sûr sur le plan focal. L'avantage le plus fondamental de la microscopie confocale est qu'elle peut effectuer des coupes optiques fines sur des échantillons fluorescents épais (jusqu'à 50 μm ou plus), avec une épaisseur d'environ 0,5 à 1,5 μm. La série d’images de tranches optiques peut être obtenue en déplaçant l’échantillon de haut en bas à l’aide du moteur pas à pas de l’axe Z- du microscope. La collecte d'informations d'image est contrôlée dans un plan sûr et ne sera pas perturbée par des signaux émis depuis d'autres emplacements sur l'échantillon. Après avoir supprimé l'influence de la fluorescence de fond et augmenté le rapport signal/bruit, le contraste et la résolution des images confocales sont considérablement améliorés par rapport aux images de fluorescence d'éclairage de champ traditionnelles. Dans de nombreux spécimens, des composants structurels complexes s’entrelacent pour former des systèmes complexes, mais une fois que suffisamment de sections optiques peuvent être collectées, nous pouvons utiliser un logiciel pour les reconstruire en trois dimensions. Cette méthode expérimentale a été largement utilisée dans la recherche biologique pour élucider les relations structurelles et fonctionnelles complexes entre cellules ou tissus.
