Avantages et inconvénients de la microscopie à balayage laser
Les avantages sont les suivants :
1. Excitée par la lumière rouge ou infrarouge, la diffusion de la lumière est faible (la diffusion des petites particules est inversement proportionnelle à la quatrième puissance de la longueur d'onde).
2. Pas besoin de trous d'épingle, capables de collecter davantage de photons dispersés à partir de la section transversale d'imagerie.
3. Les sténopés ne peuvent pas distinguer les photons diffusés émis à partir de zones défocalisées ou focales, et les multiphotons ont un meilleur rapport signal/bruit en imagerie profonde.
4. La lumière ultraviolette ou visible utilisée pour l'excitation d'un photon unique est facilement absorbée et atténuée par l'échantillon avant que le faisceau n'atteigne le plan focal, ce qui rend difficile l'excitation des couches profondes.
5. En termes d'observation en microscopie biologique, la première considération est de ne pas endommager l'état actif de l'organisme lui-même et de maintenir la circulation de l'eau, de la concentration en ions, de l'oxygène et des nutriments. Dans le domaine de l'observation de la lumière, l'énergie thermique et photonique doit rester dans la dose d'irradiation et l'énergie lumineuse qui n'endommage pas les cellules.
6. La microscopie multiphotonique présente également de nombreux avantages. En termes de résolution tridimensionnelle, d'invasion en profondeur, d'efficacité de diffusion, de lumière de fond, de rapport signal/bruit, de contrôle, etc., les microscopes laser ont des caractéristiques inégalées ou supérieures que les microscopes laser précédents ne possédaient pas.
La microscopie confocale à balayage laser multiphotonique a été étendue à divers domaines de recherche et d'application. Elle peut effectuer une observation tridimensionnelle non destructive sur des échantillons dans leur état naturel et améliorer la résolution et le rapport signal/bruit du système. En utilisant les changements dans les propriétés des matériaux après une excitation multi-photons, il peut également réaliser un stockage de données de hauteur tridimensionnelles et un micro-traitement tridimensionnel dans n'importe quelle direction, ce qui a une valeur d'application élevée. On peut croire qu'avec le développement ultérieur de la mécanique, des matériaux , et les technologies laser liées à la microscopie confocale multiphotonique, la microscopie confocale multiphotonique à balayage laser connaîtront un plus grand développement et des applications plus larges
Les inconvénients sont les suivants :
1. Uniquement pour l’imagerie par fluorescence.
2. Si l'échantillon comprend des chromophores capables d'absorber la lumière d'excitation, tels que des pigments, l'échantillon peut être soumis à des dommages thermiques.
3. La résolution est légèrement réduite, bien qu'elle puisse être améliorée en utilisant simultanément de petits trous confocaux, il y aura une perte de signal.
4. En raison des limites des lasers ultrarapides coûteux, le coût des microscopes à balayage multiphotoniques est relativement élevé.
