Biomicroscopie concernant le volume des blocs de tissus
Microscopie biologique Jusqu'à présent, la fixation à froid, la coupe ultra-mince congelée et la lyophilisation sont des méthodes de routine pour les microsections radiographiques de tissus et de cellules. Les détails de cette méthode sont expliqués comme suit :
Pour les microscopes biologiques avec condenseur, le condenseur peut être déplacé de haut en bas pour rendre la luminosité modérée, et l'ouverture de la lumière variable peut également être modifiée pour obtenir une luminosité modérée de 9b. Si la lumière est ensoleillée, le condenseur peut être élevé de manière appropriée et l'ouverture de la source de lumière variable peut être agrandie de manière appropriée. Si la lumière est trop forte, la lentille du condenseur peut être abaissée de manière appropriée et l'ouverture de la lumière d'intersection peut être réduite de manière appropriée. Si vous vous sentez toujours éblouissant dans ce cas, vous pouvez choisir un filtre approprié et le placer sur le support sous le condenseur. Ce chêne saura obtenir la luminosité qui vous satisfait. Bien sûr, le réglage des positions haute et basse du condenseur, le réglage de la taille d'ouverture de la lecture optique variable et la sélection d'un filtre adapté nécessitent une certaine période de pratique pour acquérir de l'expérience.
Un problème très important en microscopie biologique est que dans le processus d'échantillonnage et de séparation des cellules, après lyophilisation et enrobage de résine (FD), après congélation d'agrégats ultra-minces et après lyophilisation, le contenu de 65 éléments dans chaque partie doivent être manipulés avec soin. Les cellules à analyser ne peuvent pas être endommagées. Parce que la microanalyse aux rayons X implique non seulement de nombreuses étapes, mais coûte également cher. Si les cellules analysées sont des cellules endommagées ou des cellules mortes après une longue période et un traitement en plusieurs étapes, il est très regrettable de tirer des conclusions erronées. Par exemple, les cardiomyocytes séparés par un traitement à la collagénase ont deux formes, l'une est une longue tige
Biomicroscopie La quantité et la distribution des électrolytes dans ces deux types de cellules sont très différentes. Na est très élevé et K est très faible dans les cardiomyocytes circulaires, et la concentration de ca dans les nématodes est très élevée. Après vérification avec d'autres méthodes d'analyse, il est prouvé que le Na élevé et le K bas des cellules rondes et le Ca élevé dans les mitochondries sont dus à l'endommagement de la membrane cellulaire lors du processus de séparation cellulaire. La méthode de fixation glacée des cellules et des tissus consiste généralement à adopter d'abord la trempe et la fixation, puis à les stocker dans de l'azote liquide. La fixation de trempe est très importante pour l'effet de conservation. Les cellules vivantes ou les tissus frais sont riches en eau. Lors de la trempe, les parties des cellules ou des tissus qui sont en contact direct avec le réfrigérant broyé (en particulier lors de la trempe avec de l'azote liquide) sont souvent congelées et fixées en premier, formant ainsi une "coque", ce qui gêne Les parties centrales des cellules ont été broyé et fixé à froid. Par conséquent, lors de l'analyse de micro-zone X-line, on constate souvent qu'il y a des cristaux de glace au centre des cellules plus grandes. Afin d'éviter que cela ne se produise, une substance avec un point de fusion supérieur à celui de l'azote liquide mais inférieur à celui du 806c est utilisée comme réfrigérant cassé. Il existe de nombreuses substances de ce type, mais la plus simple à obtenir, la moins chère est le propane concentré (point d'ébullition - 42.120c, point de fusion - 187.10c, poids moléculaire 44.1), et la vitesse de refroidissement est la plus rapide . Mais son inconvénient est qu'il est inflammable.
Le microscope biologique peut placer la fibre musculaire sur un support spécial, de sorte que lorsque la contraction de la fibre musculaire atteint une certaine phase et doit être fixée, démarrez immédiatement la buse pour pulvériser du propane liquide sur la fibre musculaire pour l'éteindre et la réparer. Ensuite, les fibres musculaires ainsi que le cadre ont été retirés et mis dans de l'azote liquide. Si vous fixez des cellules sanguines ou des cellules isolées, concentrez d'abord les cellules par centrifugation à basse vitesse, transférez les cellules dans un flacon d'argent avec une bonne conductivité thermique, placez le flacon dans du propane liquide et congelez pour la fixation. Lors de la fixation du pancréas de rat dans le laboratoire Hall, les deux blocs d'acier ont été pré-refroidis avec de l'hélium liquide (ou de l'azote liquide), et les deux blocs de cuivre ont été serrés avec une pince et placés à l'avant et à l'arrière du pancréas pour tremper et fixer le pancréas. Les tissus ou les cellules peuvent être stockés dans de l'azote liquide pour un stockage à long terme après trempe et fixation.
Microscopie biologique En plus de la méthode de coupe ultra-mince congelée actuellement la plus respectée, voici une autre technique de dépôt utilisée par les scientifiques. Une substance est ajoutée pour former un sédiment avec le composant à analyser pour l'immobiliser avant l'analyse, et le sédiment est ensuite analysé. Par exemple, les gens utilisent souvent l'oxalate et le pyroantimonate pour déposer du ca dans les cellules musculaires. Le premier n'est pas assez sensible à la faible concentration de Ca dans le cytoplasme ; le pyroantimonate est plus sensible et peut former des dépôts denses aux électrons avec Ca libre dans le cerveau, mais le pyroantimonate n'est pas compatible avec le sodium, le manganèse, le baryum, le fer Des dépôts se forment également et sont moins spécifiques. Le processus de préparation des échantillons est similaire à la préparation d'échantillons de coupe ultra-mince au microscope électronique à transmission ordinaire, la différence est que 3% de pyroantimonate de potassium (tampon phosphate salin, pH 7,6) a été fixé pendant 6 heures avant la fixation, et sur les sections ultra-minces musculaires colorées, Des dépôts noirs ont été observés dans les lignes médianes des bandes A et 2 de chaque sarcomère, et des sections non colorées ont été utilisées pour la microanalyse aux rayons X. Le tétrachlorhydrate de diaminobenzidine (DAB) a été utilisé pour précipiter les substances contenant de l'hème, etc. La combinaison de la réaction de précipitation histochimique et du pont de micro-différenciation des rayons X peut être envisagée dans les laboratoires qui n'ont pas de conditions de coupe ultra-mince congelée. Le semi-quantitatif peut se faire en fonction de la hauteur du pic des éléments à analyser
