Comparaison du microscope confocal et du microscope optique ordinaire
Le microscope est le principal outil d’observation des cellules. Selon la source lumineuse, il peut être divisé en deux catégories : le microscope optique et le microscope électronique. Le premier utilise la lumière visible (du microscope ultraviolet à la lumière ultraviolette) comme source de lumière, tandis que le second utilise un faisceau d'électrons comme source de lumière. Le microscope optique ordinaire et le microscope confocal laser appartiennent au même microscope optique.
I. Microscope optique général
Le microscope biologique ordinaire se compose de trois parties, à savoir : ① système d'éclairage, comprenant la source de lumière et le condenseur ; ② Le système de grossissement optique, composé d'objectifs et d'oculaires, est le corps principal du microscope, afin d'éliminer l'aberration sphérique et l'aberration chromatique, les oculaires et les objectifs sont composés d'un groupe de lentilles complexe ; ③ dispositif mécanique, utilisé pour fixer le matériau et l'observation de commodité.
L'objet du microscope est clair non seulement déterminé par le grossissement, mais aussi par le pouvoir de résolution du microscope (résolution), le pouvoir de résolution se réfère au microscope (ou à l'œil humain de la cible de 25 cm) peut distinguer l'objet à de petits intervalles de la capacité de distinguer la taille du pouvoir de résolution est déterminée par la longueur d'onde de la lumière et le taux de bouche du miroir et l'indice de réfraction du milieu, exprimé dans la formule :
R=0.61λ /NANA=nsin /2 où : n=l'indice de réfraction du milieu ;=l'angle de la bouche du miroir (spécimen sur la bouche de l'objectif de l'angle de tension), NA=taux de bouche du miroir (ouverture numérique). L'angle de l'embouchure du miroir doit toujours être inférieur à 180°, donc la valeur zui de sina/2 est nécessairement inférieure à 1.
L'indice de réfraction du verre utilisé dans la production de lentilles optiques est de 1,65 à 1,78, l'indice de réfraction du milieu utilisé étant le plus proche du verre, mieux c'est. Pour les objectifs secs, le débit moyen pour l'air et la bouche du miroir est généralement de 0.05 ~ 0,95 ; lentille à huile avec de l'huile de cèdre comme milieu, le taux de bouche du miroir peut être proche de 1,5.
Longueur d'onde de la lumière ordinaire de 400~700 nm, de sorte que la valeur du pouvoir de résolution du microscope ne sera pas inférieure à 0,2 μm, le pouvoir de résolution de l'œil humain est de 0,2 mm, donc la conception générale du grossissement du microscope zui est généralement 1000X.
Deuxièmement, microscope à balayage confocal laser
Microscope confocal à balayage laser (microscope à balayage confocal laser), avec un laser comme source de lumière à balayage, point par point, ligne par ligne, surface par surface, imagerie à balayage rapide, laser à balayage et collecte de fluorescence d'un objectif commun, point de focalisation laser à balayage objectif , mais aussi une imagerie instantanée du point objet. En raison de la longueur d'onde plus courte du faisceau laser, le faisceau est très fin, de sorte que le microscope confocal à balayage laser a une haute résolution, environ 3 fois celle d'un microscope optique ordinaire. Le système est focalisé une fois et le balayage est limité à un plan de l'échantillon. Lorsque la profondeur de focalisation n'est pas la même, les images de différents niveaux de profondeur de l'échantillon peuvent être obtenues et ces informations d'image sont stockées dans l'ordinateur, grâce à une analyse et une simulation informatiques, elles peuvent montrer la structure tridimensionnelle de l'échantillon cellulaire. .
