Décrire en détail les étapes et méthodes de sélection des sondes fluorescentes pour la microscopie confocale
Dans les expériences avec des microscopes confocaux, certains indicateurs expérimentaux peuvent être détectés en utilisant l'autofluorescence de l'échantillon lui-même ou des substances exogènes, mais la plupart des substances à tester n'ont pas de fluorescence mesurable et doivent être marquées avec des sondes fluorescentes. Il a un signal fluorescent mesurable. Alors, comment choisir des sondes fluorescentes pour la microscopie confocale ?
1. Déterminer les indicateurs à tester en fonction de l'objectif de l'expérimentation
Une fois l'indice de détection déterminé, la plage de sélection des sondes fluorescentes est également déterminée. On peut voir que le choix de la sonde fluorescente à utiliser dans l'expérience est déterminé par le but de l'expérience. Par exemple, si le but de l'expérience est d'étudier les changements d'ions calcium dans les cardiomyocytes lors de la fibrillation auriculaire, il peut être déterminé que la substance à tester est des ions calcium dans les cardiomyocytes, et la plage de sélection des sondes fluorescentes est limitée à des sondes d'ions calcium capables de marquer des cellules vivantes. Aiguille.
2. Déterminer la gamme de sondes fluorescentes disponibles
Pour les nouvelles substances ou indicateurs expérimentaux, si le but de l'expérience n'est pas d'explorer de nouvelles sondes fluorescentes, vous pouvez choisir d'appliquer des sondes matures et des méthodes de marquage. Le type ou la gamme de sondes fluorescentes pouvant marquer la substance à tester peut être déterminé en recherchant dans la littérature faisant autorité ou dans les catalogues de produits de sociétés de réactifs bien connues au pays et à l'étranger.
3. Rechercher si les caractéristiques de la sonde fluorescente répondent aux exigences de préparation des échantillons fluorescents
Les caractéristiques des sondes fluorescentes affectent directement le marquage des échantillons et les résultats expérimentaux. Par conséquent, avant de sélectionner des sondes fluorescentes et des échantillons d'étiquetage dans l'expérience, il est nécessaire de bien comprendre leurs caractéristiques de fluorescence. Les caractéristiques des sondes fluorescentes à étudier comprennent :
1. Caractéristiques de réaction des sondes lumineuses et des échantillons
2. Sensibilité et intensité de fluorescence des sondes fluorescentes
3. Propriétés spectrales des échantillons marqués avec des sondes fluorescentes
4. Stabilité de la fluorescence
5. Interaction entre la fluorescence multiple dans l'échantillon
