Détermination du nombre de micro-organismes - méthode de comptage direct microscopique !
Fondamental
La méthode de comptage microscopique direct est une méthode simple, rapide et intuitive qui consiste à placer une petite quantité de la suspension de l'échantillon à tester sur une lame de verre spéciale (également connue sous le nom de compteur de bactéries) avec une surface et un volume définis, et à compter directement sous un microscope. À l'heure actuelle, les compteurs de bactéries couramment utilisés dans le pays et à l'étranger comprennent : le compteur de cellules sanguines, le compteur de bactéries Peteroff-Hauser et le compteur de bactéries Hawksley, etc. Ils peuvent tous être utilisés pour compter des suspensions telles que les levures, les bactéries et les spores de moisissures, et les principes de base sont les mêmes. Ces deux derniers compteurs de bactéries ont un volume total de 0.02 mm3 après avoir été recouverts d'un verre de protection, et la distance entre le verre de protection et la lame n'est que de 0,02 mm, donc les petites cellules telles que les bactéries peuvent être observées et comptées avec un objectif à immersion dans l'huile. En plus d'utiliser ces compteurs de bactéries, il existe également une méthode d'estimation permettant d'observer directement le rapport entre la surface du frottis et la surface du champ visuel au microscope. Cette méthode est généralement utilisée pour l'examen bactériologique du lait. L’avantage de la méthode de comptage direct au microscope est qu’elle est intuitive, rapide et facile à utiliser. Mais l’inconvénient de cette méthode est que les résultats mesurés sont généralement la somme des bactéries mortes et vivantes. À l'heure actuelle, il existe certaines méthodes pour surmonter cette lacune, telles que la combinaison de bactéries vivantes colorant une culture en microchambre (courte durée) et l'ajout d'inhibiteurs de division cellulaire pour atteindre l'objectif de ne compter que les bactéries vivantes.
Dans cette expérience, un hémocytomètre a été utilisé comme exemple pour effectuer un comptage direct au microscope. Pour les modalités d’utilisation des deux autres compteurs de bactéries, veuillez vous référer aux instructions de chaque fabricant. Le comptage direct au microscope avec un hémocytomètre est une méthode de comptage microbien couramment utilisée. Le tableau de comptage est une lame de verre spécialement conçue sur laquelle quatre fentes forment trois plates-formes ; la plate-forme plus large au milieu est divisée en deux moitiés par une courte fente horizontale, et chaque côté de la plate-forme est bordé d'une grille. Chaque grille est divisée en neuf grands carrés, et le grand carré du milieu est la chambre de comptage. L'échelle de la salle de comptage a généralement deux spécifications, l'une est qu'un grand carré est divisé en 25 carrés du milieu et chaque carré du milieu est divisé en 16 petits carrés ; l'autre est qu'un grand carré est divisé en 16 carrés du milieu, et chaque carré du milieu est divisé en 25 petits carrés, mais quel que soit le type de tableau de comptage, il y a 400 petits carrés dans chaque grand carré. La longueur du côté de chaque grand carré est de 1 mm, puis l'aire de chaque grand carré est de 1 mm 2. Une fois le verre de protection recouvert, la hauteur entre le verre de protection et le verre coulissant est de 0,1 mm, donc le volume du la chambre de comptage est de 0,1 mm (un dix millième de millilitre).
