Détermination du nombre de micro-organismes-Méthode de comptage direct microscopique !
La croissance de la population bactérienne se manifeste par une augmentation du nombre de cellules ou une augmentation du matériel cellulaire. Les méthodes permettant de déterminer le nombre de cellules comprennent le comptage microscopique direct, le comptage sur plaque, l'estimation de la turbidité par spectrophotomètre, le nombre le plus probable de MPN et la filtration sur membrane. (filtration sur membrane), etc. Les méthodes de mesure des substances cellulaires comprennent la détermination du poids sec des cellules, la détermination de certains composants cellulaires tels que la teneur en azote, la teneur en ARN et en ADN et la détermination des produits métabolites. En bref, il existe de nombreuses méthodes pour mesurer la croissance microbienne, chacune présentant ses propres avantages et inconvénients. La méthode doit être choisie en fonction des exigences spécifiques du travail. Cette expérience présente principalement la méthode de comptage direct au microscope qui est couramment utilisée dans les travaux de production et de recherche scientifique.
1. Exigences liées à l'objectif
1. Clarifier le principe du comptage avec une planche de comptage des cellules sanguines.
2. Maîtrisez la méthode de comptage des micro-organismes à l'aide d'une planche de comptage de cellules sanguines.
2. Principes de base
La méthode de comptage direct au microscope est une méthode simple, rapide et intuitive qui place une petite quantité de suspension de l’échantillon à tester sur une lame spéciale d’une surface et d’un volume déterminés (également appelé bactériomètre) et la compte directement sous un microscope. Méthodes. Actuellement, les bactériomètres couramment utilisés au pays et à l'étranger comprennent : l'hémocytomètre, le bactériomètre Peteroff-Hauser et le bactériomètre Hawksley, etc. Ils peuvent tous être utilisés pour compter les levures, les bactéries, les spores de moisissures et autres suspensions, et les principes de base sont les mêmes. Ces deux derniers compteurs bactériens ont un volume total de 0.02 mm3 après avoir été recouverts d'un verre de protection, et la distance entre le verre de protection et la lame n'est que de 0,02 mm. Par conséquent, un objectif à immersion dans l’huile peut être utilisé pour observer et détecter des cellules plus petites telles que des bactéries. compter. En plus d'utiliser ces bactériomètres, il existe également une méthode d'estimation qui observe directement le rapport entre la surface du frottis et la surface du champ visuel au microscope. Cette méthode est généralement utilisée pour l'examen bactériologique du lait. Les avantages de la méthode de comptage direct au microscope sont qu’elle est intuitive, rapide et facile à utiliser. Cependant, l’inconvénient de cette méthode est que le résultat mesuré est généralement la somme des bactéries mortes et des bactéries vivantes. Il existe actuellement des méthodes pour surmonter cette lacune, telles que la combinaison d'une culture en microchambre de coloration de bactéries viables (courte durée) et l'ajout d'inhibiteurs de division cellulaire pour atteindre l'objectif de ne compter que les bactéries viables.
Cette expérience utilise un hémocytomètre comme exemple pour effectuer un comptage direct au microscope. Pour l’utilisation des deux autres bactériomètres, veuillez vous référer aux instructions de chaque fabricant. Le comptage direct au microscope à l’aide d’un hémocytomètre est une méthode de dénombrement microbien couramment utilisée. La planche de comptage est une glissière spéciale avec quatre rainures formant trois plates-formes ; la plate-forme plus large au milieu est divisée en deux moitiés par une courte rainure horizontale, et il y a une grille de chaque côté de la plate-forme. Chaque grille carrée est divisée en neuf grands carrés, et le grand carré au milieu est la salle de comptage. La structure du tableau de comptage des cellules sanguines est illustrée à la figure {{0}}. Il existe généralement deux spécifications concernant l'échelle de la chambre de comptage. L'un est un grand carré divisé en 25 carrés moyens, et chaque carré moyen est divisé en 16 petits carrés (Figure 15-2) ; l'autre est un grand carré. La grille carrée est divisée en 16 carrés moyens et chaque carré moyen est divisé en 25 petits carrés. Cependant, quel que soit le type de tableau de comptage, il y a 400 petits carrés dans chaque grand carré. La longueur du côté de chaque grand carré est de lmm, donc l’aire de chaque grand carré est de lmm2. Une fois la lamelle recouverte, la hauteur entre la lamelle et la lame est de 0,l mm, donc le volume de la chambre de comptage est de 0, lmm3 (un dix millième de millilitre). Figure 15-1 Structure du tableau de comptage des cellules sanguines (1) Figure 15-2 Structure du tableau de comptage des cellules sanguines (2) A. Vue de face ; B. Coupe longitudinale ; grille carrée agrandie, le grand carré au milieu est la chambre de comptage 1. Tableau de comptage des cellules sanguines ; 2. Lamelle de couverture ; 3. Lors du comptage dans la chambre de comptage, comptez généralement le nombre total de bactéries dans cinq carrés, puis trouvez la valeur moyenne de chaque carré, puis multipliez par 25 ou 16 pour obtenir le nombre total de bactéries dans un grand carré. dans le nombre total de bactéries dans 1 ml de solution bactérienne. Supposons que le nombre total de bactéries dans les cinq carrés du milieu soit A et que le facteur de dilution de la solution bactérienne soit B. S'il s'agit d'une plaque de comptage avec 25 carrés du milieu, alors le nombre total de bactéries dans 1 ml de solution bactérienne {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (morceaux) De la même manière, s'il s'agit d'une plaque de comptage à 16 carrés, le nombre total de bactéries dans 1 mL de solution bactérienne {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (morceaux),,
