Améliorer les avantages de la microscopie à balayage laser multiphotonique
La microscopie multiphotonique à balayage laser constitue une amélioration majeure par rapport à la microscopie optique. Il peut observer la structure profonde des cellules vivantes, des cellules et des tissus fixes, et peut obtenir des structures multicouches claires et nettes en plan Z, c'est-à-dire des sections optiques, à partir desquelles il peut construire la structure solide tridimensionnelle du spécimen. La microscopie confocale utilise une source de lumière laser qui, après expansion, remplit tout le plan focal arrière de l'objectif, puis traverse le système de lentilles de l'objectif pour converger vers un très petit point sur le plan focal de l'échantillon. En fonction de l'ouverture numérique de l'objectif, le diamètre du point d'éclairage le plus brillant est d'environ 0,25 ~ 0,8 μm et la profondeur est d'environ 0,5 ~ 1,5 μm. . La taille de la tache confocale dépend de la conception du microscope, de la longueur d'onde du laser, des caractéristiques de l'objectif, des paramètres d'état de l'unité de numérisation et des propriétés de l'échantillon. La plage d'éclairage et la profondeur d'éclairage d'un microscope de champ sont grandes, tandis que l'éclairage d'un microscope confocal est concentré sur une mise au point précise sur le plan focal. L'avantage le plus fondamental de la microscopie confocale est qu'elle peut effectuer une coupe optique fine d'échantillons fluorescents épais (pouvant atteindre 50 μm ou plus) et que l'épaisseur des tranches est d'environ 0,5 à 1,5 μm. Des images de coupes optiques en série peuvent être obtenues en déplaçant l’échantillon de haut en bas à l’aide d’un moteur pas à pas sophistiqué sur l’axe Z du microscope. La collecte d'informations d'image est contrôlée dans un plan précis sans être interférée par des signaux émis depuis d'autres emplacements sur l'échantillon. Après avoir supprimé l'influence de la fluorescence de fond et augmenté le rapport signal/bruit, le contraste et la résolution des images confocales sont considérablement améliorés par rapport aux images de fluorescence traditionnelles éclairées sur le terrain. Dans de nombreux spécimens, de nombreux composants structurels complexes sont entrelacés pour former des systèmes complexes, mais une fois que suffisamment de sections optiques peuvent être collectées, nous pouvons les reconstruire en trois dimensions grâce à un logiciel. Cette méthode expérimentale a été largement utilisée dans la recherche biologique pour élucider les relations structurelles et fonctionnelles complexes entre cellules ou tissus.
