Élargir les avantages de la microscopie à balayage laser multiphoton
Le microscope multiphoton à balayage laser est une amélioration significative de la microscopie optique, principalement manifesté dans la capacité d'observer des structures profondes des cellules vivantes, des cellules fixes et des tissus, et d'obtenir des tranches de planes Z multi-couches claires et nettes, à savoir les tranches optiques, qui peuvent être utilisées pour construire des structures de solides tridimensionnelles des spécimens. Le microscope confocal utilise une source de lumière laser, qui est étendue pour remplir le plan focal entier de la lentille objective, puis convergé en très petits points sur le plan focal de l'échantillon à travers le système de lentille de l'objectif. Selon l'ouverture numérique de la lentille objective, le diamètre du point d'éclairage brillant est d'environ 0. 25-0. 8 μm, et la profondeur est environ 0. 5-1. 5 μm. La taille du point confocal est déterminée par la conception du microscope, la longueur d'onde laser, les caractéristiques objectives, les paramètres de l'état de l'unité de balayage et les propriétés de l'échantillon. La plage d'éclairage et la profondeur d'un microscope sur champ sont grandes, tandis que l'éclairage d'un microscope confocal se concentre sur un point focal sur le plan focal. L'avantage de base de la microscopie confocale est qu'il peut effectuer une section optique fine sur des échantillons fluorescents épais (jusqu'à 5 0 μm ou plus), avec une épaisseur d'environ 0,5 à 1,5 μm. La série d'images de tranche optique peut être obtenue en déplaçant l'échantillon de haut en bas à l'aide du moteur pas à pas de l'axe Z du microscope. La collecte des informations d'image est contrôlée dans le plan * *, sans interférence à partir de signaux émis par d'autres positions sur l'échantillon. Après avoir supprimé l'influence de la fluorescence de fond et augmenté le rapport signal / bruit, le contraste et la résolution des images confocales sont significativement améliorées par rapport aux images traditionnelles de fluorescence sur l'éclairage du champ. Dans de nombreux échantillons, les composants structurels complexes entrelacent pour former des systèmes complexes, mais une fois que des sections optiques suffisantes peuvent être collectées, nous pouvons utiliser un logiciel pour les reconstruire en trois dimensions. Cette méthode expérimentale a été largement utilisée dans la recherche biologique pour élucider les relations structurelles et fonctionnelles complexes entre les cellules ou les tissus.
