Méthodes et précautions d'utilisation du microscope à fluorescence
Méthode d'utilisation :
(1) Placez la feuille de matériau sur la platine porteuse.
(2) Allumez le régulateur de tension du microscope à fluorescence. Appuyez ensuite sur le groupe de démarrage pour allumer la lampe UV ne doit pas être éteinte pendant 15 minutes et ne doit pas être redémarrée pendant 3 minutes après son extinction.
(3) Tournez le filtre d'excitation sur v, le film dichroïque sur v, choisissez un filtre de blocage 495 ou 475 nm.
(4) Choisissez la microscopie à lentille d'objectif de réception de fluorescence uvFL40, uvFL100.
(5) Ajoutez de l’huile non fluorescente sur la lame, d’abord 40 x, puis 100 x en microscopie de focalisation. Montrer la fluorescence.
(7) Parce que le matériau fluorescent par irradiation ultraviolette avec la croissance de la fluorescence s'est progressivement affaibli au fil du temps, l'examen microscopique doit donc modifier fréquemment le champ de vision.
(8) peut également utiliser du matériel de microscopie à faible grossissement uvFL10 ou uvFL20 (à faible grossissement sans ajouter d'huile non fluorescente).
Méthode d'enregistrement d'images fluorescentes :
Image de fluorescence vue au microscope à fluorescence, l'une avec les caractéristiques morphologiques, la seconde avec la couleur et la luminosité de la fluorescence, pour juger les résultats, les deux doivent être combinés avec un jugement complet. Les résultats sont enregistrés selon des indicateurs subjectifs, c'est-à-dire par observation visuelle par le travailleur. Comme observation qualitative générale, fondamentalement fiable. Avec le développement de la technologie et de la science, à des degrés divers, l'utilisation d'indicateurs objectifs pour enregistrer les résultats du jugement, tels que l'utilisation d'un spectrophotomètre cellulaire, d'un analyseur d'images et d'autres instruments. Cependant, les résultats enregistrés par ces instruments doivent également être combinés à un jugement subjectif.
La technologie de photographie au microscope à fluorescence est très nécessaire pour enregistrer des images de fluorescence, car la fluorescence est facile à s'estomper et à s'affaiblir, pour enregistrer instantanément les résultats de la photographie. La méthode est fondamentalement la même que celle de la micrographie ordinaire. Il suffit d'utiliser un film photographique à grande vitesse tel que ASA200 ci-dessus ou 24. ci-dessus. Parce que la lumière ultraviolette sur l'effet d'éclatement de fluorescence, comme les marqueurs FITC, dans l'irradiation de lumière ultraviolette pendant 30 secondes, la luminosité de la fluorescence est réduite de 50 %. Par conséquent, la vitesse d’exposition est trop lente pour capturer l’image de fluorescence. Les microscopes à fluorescence de recherche générale sont dotés de systèmes de microphotographie semi-automatiques ou entièrement automatiques.
Précautions:
(1) Opérez en stricte conformité avec les exigences du manuel d’usine du microscope à fluorescence, ne modifiez pas la procédure arbitrairement.
(2) L'inspection doit être effectuée dans la chambre noire. Après être entré dans la chambre noire, branchez l'alimentation électrique, allumez la lampe au mercure à ultra haute pression pendant 5-15 min, attendez que la source lumineuse émette une forte lumière pour se stabiliser et que les yeux soient complètement adaptés à la chambre noire, et puis commencez à observer le spécimen.
(3) Pour éviter les dommages oculaires causés par la lumière ultraviolette, des lunettes de protection doivent être portées lors du réglage de la source lumineuse.
(4) vérifier le temps à chaque fois à 1 ~ 2h est approprié, plus de 90min, l'intensité lumineuse de la lampe au mercure à ultra-haute pression a progressivement diminué, la fluorescence s'est affaiblie ; spécimens irradiés par la lumière ultraviolette 3 ~ 5min, la fluorescence est également considérablement affaiblie ; par conséquent, * ne doit pas dépasser 2 à 3 heures.
(5) la durée de vie de la source lumineuse du microscope à fluorescence est limitée, l'échantillon doit être inspecté de manière centralisée, afin de gagner du temps et de protéger la source lumineuse. Lorsqu'il fait chaud, il faut ajouter un refroidissement par ventilateur, une nouvelle ampoule doit être enregistrée dès le début de l'utilisation du temps. Lorsque la lampe est éteinte et souhaite être réutilisée, l'ampoule doit être suffisamment refroidie avant de l'allumer. La source lumineuse doit être évitée plusieurs fois.
(6) Observez l’échantillon immédiatement après la coloration, car la fluorescence diminuera progressivement avec le temps. Si l'échantillon est placé dans un sac en plastique polyéthylène conservé à 4 degrés, cela peut retarder le temps d'affaiblissement de la fluorescence et empêcher l'évaporation de l'agent de scellement.
(7) Critères de jugement pour la luminosité de la fluorescence : généralement divisés en quatre niveaux, c'est-à-dire "un" - fluorescence nulle ou faible visible. '+' - uniquement une fluorescence visible et claire. '+ +' - visible avec un
