Les microscopes à fluorescence peuvent être divisés en deux types selon le principe du chemin optique:
1. Microscope à fluorescence à transmission
Les microscopes à fluorescence plus anciens utilisent un projecteur pour exciter la fluorescence en passant la source de lumière d'excitation à travers le matériau de l'échantillon. Son avantage est une forte fluorescence à un faible grossissement, mais son désavantage est que sa fluorescence diminue avec l'augmentation du grossissement. Il convient donc uniquement à l'observation des matériaux d'échantillons plus grands.
2. Microscope à fluorescence de lumière tombant
La lumière d'excitation tombe de la lentille objective sur la surface de l'échantillon, en utilisant la même lentille objective que le condenseur d'éclairage et la lentille objective pour collecter la fluorescence.
Un séparateur de faisceau à double couleur (miroir dichroïque) doit être ajouté au chemin optique, qui forme un angle de 45 degrés avec l'axe optique. La lumière d'excitation est réfléchie dans la lentille objective et concentrée sur l'échantillon. La fluorescence générée par l'échantillon, ainsi que la lumière d'excitation réfléchie à partir de la surface de la lentille objective et de la vitre de couverture, entrez la lentille objective en même temps et retournez au séparateur de faisceau de couleur double pour séparer la lumière d'excitation et la fluorescence. La lumière d'excitation résiduelle est ensuite bloquée par l'absorption du filtre. Si différentes combinaisons de filtres d'excitation, de séparateurs de faisceau à double couleur et de filtres de blocage sont utilisés, ils peuvent répondre aux besoins de différents produits de réaction fluorescents.
Les avantages de ce microscope à fluorescence sont un éclairage uniforme de champ, une imagerie claire et une fluorescence plus forte avec un grossissement plus grand.
3. Microscope à contraste de phase
Le microscope à contraste de phase est un microscope qui peut convertir la différence de phase (ou la différence de chemin optique) généré lorsque la lumière passe par un objet en amplitude (intensité de lumière). Principalement utilisé pour observer les cellules vivantes, les sections de tissu non colorées ou les échantillons colorés dépourvus de contraste.
L'œil humain ne peut que distinguer les changements de la longueur d'onde (couleur) et de l'amplitude de la lumière visible, mais ne peut pas distinguer les changements de phase. La plupart des échantillons biologiques sont très transparents, et l'amplitude des ondes légères reste fondamentalement inchangée après avoir traversé, avec seulement des changements de phase.
Le microscope à contraste de phase convertit essentiellement la différence de chemin optique de la lumière visible passant par l'échantillon dans la différence d'amplitude, améliorant ainsi le contraste entre diverses structures et les rendant clairs et visibles. Après avoir traversé l'échantillon, la lumière subit une réfraction, déviant du chemin optique d'origine et retardé de 1/4 λ (longueur d'onde). Si la différence de chemin optique est augmentée ou diminuée d'un autre 1/4 λ, la différence de chemin optique devient 1/2 λ et l'interférence entre les deux faisceaux lumineux augmente ou diminue après la combinaison de l'axe, améliorant le contraste.
