Les microscopes à fluorescence peuvent être divisés en deux types selon le principe du trajet lumineux :
1. Microscope à fluorescence par transmission
Dans les anciens microscopes à fluorescence, la source de lumière d'excitation traverse le matériau de l'échantillon à travers un condenseur pour exciter la fluorescence. L’avantage est que la fluorescence est forte à faible grossissement, mais l’inconvénient est qu’elle s’affaiblit à mesure que le grossissement augmente. Il ne convient donc qu’à l’observation de spécimens de plus grande taille.
2. Microscopie à épifluorescence
La lumière d'excitation tombe de la lentille d'objectif vers le bas sur la surface de l'échantillon, c'est-à-dire que la même lentille d'objectif est utilisée comme condenseur d'éclairage et comme lentille d'objectif pour collecter la fluorescence.
Un séparateur de faisceau dichroïque (miroir dichroïque) doit être ajouté au chemin optique, qui forme un angle de 45o par rapport à l'axe optique. La lumière d'excitation est réfléchie dans la lentille de l'objectif et concentrée sur l'échantillon. La fluorescence générée par l'échantillon est réfléchie par la surface de l'objectif et le couvercle. La lumière d'excitation réfléchie sur la surface de la lame de verre pénètre en même temps dans la lentille d'objectif et retourne au séparateur de faisceau dichroïque pour séparer la lumière d'excitation et la fluorescence. La lumière d'excitation restante est ensuite absorbée par le filtre bloquant. Si vous utilisez différents inserts combinés de filtre d'excitation/séparateur de faisceau bicolore/filtre de blocage, vous pouvez répondre aux besoins de différents produits de réaction de fluorescence.
L'avantage de ce type de microscope à fluorescence est que le champ de vision est uniformément éclairé, l'image est claire et plus le grossissement est grand, plus la fluorescence est forte.
Quelles sont les principales catégories de microscopes optiques ?
1. Microscope optique ordinaire
Les microscopes optiques ordinaires sont principalement composés des éléments suivants : le système d'éclairage, qui implique la source lumineuse et le condenseur ; le système de grossissement optique, composé de l'objectif et de l'oculaire. Il s'agit de la partie la plus critique du microscope et est conçue pour éviter les aberrations sphériques et chromatiques excessives, l'oculaire et l'objectif sont composés de groupes de lentilles complexes.
2. Microscope confocal à balayage laser
Le microscope confocal laser à balayage semble très haut de gamme et compliqué. En fait, il utilise simplement le laser comme source de lumière de balayage pour numériser et imager rapidement des objets point par point, ligne par ligne et surface par surface.
Sur la base de la longueur d'onde plus courte du faisceau laser, le faisceau lui-même est très fin, ce qui détermine que le microscope confocal à balayage laser a une haute résolution, environ trois fois supérieure à celle d'un microscope optique ordinaire. Ce type de microscope est utilisé pour observer la morphologie cellulaire, analyser quantitativement les composants biochimiques intracellulaires et mesurer la morphologie cellulaire.
3. Microscope à champ sombre
Il y a une plaque lumineuse au centre du condenseur d'un microscope à fond noir, qui empêche la lumière d'éclairage de pénétrer directement dans l'objectif. Seule la lumière réfléchie et diffractée par l’échantillon peut pénétrer dans l’objectif. Par conséquent, l’arrière-plan du champ de vision est noir et les bords des objets sont clairs.
