Comment choisir le microscope confocal qui vous convient ? Existe-t-il une méthode spécifique ?
La microscopie confocale présente plus d'avantages que la microscopie à champ large. La microscopie confocale peut effectuer une coupe optique continue des échantillons et exclure les interférences de signal des plans non focaux. Pour cette raison, l'application de la microscopie confocale est en effet plus courante. Cependant, il existe de plus en plus de microscopes confocaux sur le marché. Comment choisir?
La microscopie confocale présente plus d'avantages que la microscopie à champ large. La microscopie confocale peut créer des sections optiques continues d'échantillons et exclure les interférences de signal des plans non focaux. Pour cette raison, la microscopie confocale est en effet plus courante. Cependant, il existe de plus en plus de microscopes confocaux sur le marché. Comment choisir? Lors du choix d'un microscope confocal, il y a deux considérations fondamentales et importantes : le type d'échantillon que vous souhaitez étudier (par exemple, des cellules fixes ou vivantes) et le type de test que vous souhaitez effectuer (par exemple, des processus cellulaires statiques ou dynamiques).
Imagerie confocale de cellules fixées
Pour imager des cellules ou des tissus fixés et colorés, nous choisissons généralement le confocal à balayage laser (LSCM). C'est principalement parce que les cellules mortes fixes manquent d'événements biologiques rapides dans les cellules vivantes et peuvent mieux bénéficier de la résolution spatiale plus élevée du LSCM. L'imagerie LSCM consiste à trancher optiquement l'échantillon au laser, et la vitesse de balayage (en fonction de la vitesse du miroir du réseau de balayage) est généralement de 1 ips. Des temps d'exposition plus longs signifient un plus grand risque de photoblanchiment, mais pour les cellules mortes fixes, le temps n'est pas critique et nous pouvons le calculer en prenant plusieurs photos.
Imagerie confocale de cellules vivantes
L'imagerie des cellules vivantes nécessite une protection supplémentaire contre les environnements hostiles. Lors de l'imagerie, notre première considération est de maintenir la viabilité et la santé des cellules. Les éléments chauffants à température constante et les systèmes de perfusion sont essentiels, en particulier pour les études accélérées. Les événements biochimiques rapides qui contrôlent l'état physiologique des cellules vivantes sont ce que la plupart des gens veulent étudier, mais ces événements sont trop rapides pour le LSCM conventionnel. De plus, une exposition prolongée au LSCM a également induit des dommages légers toxiques pour les cellules. Par conséquent, l'imagerie des cellules vivantes nécessite des microscopes confocaux spéciaux.
Il existe généralement deux options pour l'imagerie confocale des cellules vivantes : les confocaux à balayage laser à balayage rapide et les confocaux à disque rotatif. La microscopie confocale à balayage rapide remplace les galvanomètres miroirs plus lents par des miroirs à balayage résonant plus rapides, permettant des vitesses de balayage allant jusqu'à 30 ips ; alors que les confocaux à disque rotatif (SDCM) ont l'avantage d'un balayage plus rapide (bien qu'inévitablement avec une perte de résolution spatiale), sa vitesse peut théoriquement atteindre 2000 images par seconde (en pratique, elle est souvent limitée par d'autres facteurs).
Si vous êtes préoccupé par le photoblanchiment ou un signal de fluorescence très faible, le SDCM peut être plus approprié. SDCM utilise deux disques rotatifs avec des micropuits en réseau pour disperser la lumière d'excitation. Contrairement au LSCM, qui scanne le spot de l'échantillon, le SDCM acquiert plusieurs spots à la fois (environ 100 spots de pixels), de sorte que la vitesse est considérablement augmentée, et le photoblanchiment du SDCM et moins de phototoxicité. Cependant, vous pouvez également utiliser des confocaux à balayage rapide pour augmenter la vitesse de balayage, combinés à des détecteurs très sensibles, et réduire l'énergie lumineuse d'excitation pour réduire la phototoxicité, ce qui peut maintenir les riches fonctions des confocaux traditionnels.
Système d'imagerie confocale automatisé
Certains chercheurs aiment trouver des moyens de modifier le microscope en fonction de leurs besoins individuels. Et certains chercheurs ne s'intéressent même pas au fonctionnement réel des microscopes. Pour ces derniers, un microscope confocal automatisé peut être plus à leur goût. Par exemple, l'Olympus FluoViewFV10i est un tel microscope confocal laser 4-de bureau entièrement automatique. Sa structure intégrée compacte ne nécessite pratiquement aucun espace d'installation. Ce type d'instrument est idéal pour les chercheurs qui doivent effectuer quotidiennement de nombreuses acquisitions de données d'image, mais bien sûr, ils ne reflètent pas pleinement la fonctionnalité et la flexibilité des confocaux traditionnels. De plus, le NikonA1 est également un système confocal entièrement automatique. Comme la plupart des microscopes confocaux à balayage conventionnels, le NikonA1 utilise une tête de balayage galvanomètre, qui a une résolution plus élevée que l'A1R avec une tête de balayage hybride, mais une vitesse légèrement plus lente (A1R ~ 30fps)
