En quoi la microscopie à fluorescence diffère de la microscopie confocale laser
Microscope à fluorescence
1, le microscope à fluorescence consiste à utiliser la lumière ultraviolette comme source de lumière, utilisée pour irradier l'objet à examiner, afin qu'il émette de la fluorescence, puis à observer la forme de l'objet et son emplacement au microscope. Le microscope à fluorescence est utilisé pour étudier l'absorption, le transport, la distribution et la localisation de substances chimiques dans les cellules. Certaines substances présentes dans la cellule, comme la chlorophylle, peuvent devenir fluorescentes après irradiation par la lumière ultraviolette ; certaines substances ne peuvent pas émettre de fluorescence par elles-mêmes, mais si elles sont colorées avec des colorants fluorescents ou des anticorps fluorescents, elles peuvent également émettre une fluorescence après irradiation par la lumière ultraviolette, et la microscopie à fluorescence est l'un des outils de recherche qualitative et quantitative sur ce type de substances.
2, principe du microscope à fluorescence :
(A) source de lumière : la source de lumière émet différentes longueurs d’onde de lumière (de l’ultraviolet à l’infrarouge).
(B) source de filtre d'excitation : à travers l'échantillon peut produire une fluorescence d'une longueur d'onde spécifique de lumière, tout en bloquant l'excitation de la lumière inutile de fluorescence.
(C) Échantillon fluorescent : généralement coloré avec un fluorochrome.
(D) Filtres bloquants : bloquent la lumière d'excitation qui n'est pas absorbée par l'échantillon pour transmettre sélectivement la fluorescence, et certaines longueurs d'onde de la fluorescence sont également transmises sélectivement. Un microscope qui utilise la lumière ultraviolette comme source de lumière pour rendre l'objet irradié fluorescent. Le microscope électronique a été assemblé pour la première fois en 1931 à Berlin, en Allemagne, par Knorr et Haroska. Ce microscope utilise un faisceau d'électrons à grande vitesse au lieu d'un faisceau lumineux. Parce que la longueur d'onde du flux électronique est beaucoup plus courte que l'onde lumineuse, le grossissement du microscope électronique peut atteindre 800,000 fois, la résolution de la limite minimale de 0,2 nanomètres. . En 1963, on a commencé à utiliser le microscope électronique à balayage pour voir la surface de la minuscule structure de l'objet.
3, le champ d'application : utilisé pour agrandir l'image de petits objets. Généralement utilisé en biologie, médecine, particules microscopiques et autres observations.
Microscope confocal
1, microscope confocal dans la lumière réfléchie sur la route plus une demi-lentille mi-réfléchissante, aura traversé la lentille de la lumière réfléchie pliée dans d'autres directions, dans sa mise au point sur un déflecteur avec un sténopé, le trou est situé dans le foyer, derrière le déflecteur se trouve un tube photomultiplicateur. On peut imaginer que la lumière réfléchie avant et après le point focal de la lumière du détecteur à travers cet ensemble de système confocal, ne pourra pas se concentrer sur le petit trou, sera bloquée par le déflecteur. Le photomètre mesure donc l'intensité de la lumière réfléchie au point focal.
2, principe : le microscope optique traditionnel utilise une source de lumière de champ, l'image de chaque point de l'échantillon sera perturbée par la diffraction ou la diffusion de la lumière des points voisins ; Le microscope confocal à balayage laser utilise un faisceau laser à travers le trou d'épingle éclairant pour former une source ponctuelle de lumière sur l'échantillon dans le plan focal du balayage de chaque point de l'échantillon, l'échantillon est irradié, lors de la détection du trou d'épingle lors de l'imagerie. , par la détection du sténopé après le tube photomultiplicateur (PMT) ou le dispositif d'électrocouplage à froid (cCCD) point par point ou point par point ou point par point, l'intensité lumineuse est mesurée par un photomètre. cCCD) reçoit point par point ou ligne par ligne et forme rapidement une image fluorescente sur l'écran de l'ordinateur. Le sténopé d'éclairage et le sténopé de détection par rapport au plan focal de l'objectif sont conjugués, le point sur le plan focal se concentrant en même temps sur le sténopé d'éclairage et le sténopé d'émission, le point en dehors du plan focal ne sera pas dans le sténopé de détection à l'imagerie, de sorte que l'image confocale soit le spécimen de la section efficace optique, surmontant les défauts des images floues des microscopes ordinaires.
3, domaines d'application : médecine, recherche animale et végétale, biochimie, bactériologie, biologie cellulaire, embryologie tissulaire, science alimentaire, génétique, pharmacologie, physiologie, optique, pathologie, botanique, neurosciences, biologie marine, science des matériaux, science électronique, mécanique, géologie pétrolière, minéralogie.
