Comment choisir le microscope à fluorescence approprié
Le microscope à fluorescence est un équipement d'imagerie microscopique standard dans les laboratoires et les services de pathologie, qui utilise les caractéristiques de fluorescence pour l'observation et l'imagerie. Elle est largement utilisée dans divers domaines tels que la biologie cellulaire, la neurobiologie, la botanique, la microbiologie, la pathologie, la génétique, etc. L'imagerie par fluorescence présente les avantages d'une sensibilité et d'une spécificité élevées, ce qui la rend très adaptée à l'observation de la distribution de protéines, organites, etc. . dans les tissus et les cellules, en étudiant la colocalisation et les interactions, en suivant les processus dynamiques de la vie tels que les changements de concentration en ions, etc.
Sélection de microscopes
Les microscopes à fluorescence sont principalement divisés en trois catégories : les microscopes à fluorescence droits (adaptés au tranchage), les microscopes à fluorescence inversée (adaptés aux cellules vivantes et également au tranchage) et les microscopes à fluorescence stéréo (adaptés aux spécimens plus grands, tels que les plantes, le poisson zèbre (adulte/ embryonnaire), medaka, organes de souris/rat, etc.).
Sélection de blocs filtrants fluorescents
La sélection des blocs de filtres doit non seulement prendre en compte les longueurs d'onde d'excitation et d'émission des sondes fluorescentes, mais également déterminer s'il existe une excitation non spécifique et s'il existe une diaphonie de couleur pour les échantillons marqués multicolores. Dans l'expérience, nous choisirons autant que possible la longueur d'onde la plus proche du pic d'excitation, et la plage de réception devrait inclure l'émission maximale. Le pic d'excitation de l'Alexa Fluor 488 est de 500 nm et un filtre d'excitation 480/40 peut être sélectionné dans un microscope à fluorescence. Les blocs filtrants fluorescents couramment utilisés en microscopie à fluorescence peuvent être divisés en deux types : passe-long (LP) et passe-bande (BP), qui doivent également être sélectionnés en fonction des besoins.
Microscope confocal
Dans les observations traditionnelles en microscopie à fluorescence, en raison du chevauchement des substances fluorescentes marquées et des structures de fluorescence spontanée, elles sont étroitement liées les unes aux autres. Cependant, les objectifs traditionnels de microscopie à fluorescence descendante collectent non seulement la lumière du plan focal, mais la diffusent également de haut en bas du plan focal, ce qui entraîne une réduction significative de la résolution et du contraste de l'image.
L'imagerie confocale détecte uniquement la lumière réfléchie par le plan d'autofocalisation, résolvant ainsi le problème ci-dessus. La source de lumière forme une petite et fine tache sur le plan focal à travers un sténopé, et la lumière émise par le plan focal est collectée à travers l'objectif. La majorité de la fluorescence émise depuis des points situés au-dessus ou au-dessous du plan focal de l'objectif ne peut pas converger vers le sténopé. Seule la fluorescence située dans le plan focal et une petite partie de la fluorescence défocalisée peuvent traverser le sténopé, tandis que le faisceau lumineux en dehors du plan focal converge devant ou derrière la plaque à sténopé et est empêché d'entrer dans le détecteur par le sténopé. L'image détectée provient du plan focal, la qualité de l'image finale est donc grandement améliorée.
En raison des divers avantages et du caractère pratique de la microscopie confocale à balayage laser, elle constitue actuellement un assistant expérimental indispensable dans les domaines de la biologie cellulaire, de la botanique et de la recherche cellulaire de haute précision. En même temps, dans les futurs centres de recherche scientifique, ce sera l’outil de recherche le plus fondamental et le plus central.
