Comment choisir le bon microscope à fluorescence
Le microscope à fluorescence est un équipement d'imagerie microscopique standard pour les laboratoires et les services de pathologie. Il utilise les caractéristiques de fluorescence pour l'observation et l'imagerie. Il est largement utilisé en biologie cellulaire, neurobiologie, botanique, microbiologie, pathologie, génétique et autres domaines. L'imagerie par fluorescence présente les avantages d'une sensibilité et d'une spécificité élevées, et convient très bien à l'observation de la distribution de protéines et d'organites spécifiques dans les tissus et les cellules, à l'étude de la colocalisation et de l'interaction, au suivi des processus dynamiques de la vie tels que les changements de concentration d'ions , etc.
Choix du microscope
Les microscopes à fluorescence sont principalement divisés en trois catégories : les microscopes à fluorescence droits (adaptés à la coupe), les microscopes à fluorescence inversés (adaptés aux cellules vivantes, en tenant compte de la coupe), les microscopes à fluorescence stéréoscopiques (adaptés aux spécimens plus grands, tels que les plantes, les poissons zèbres (adultes/ embryon), médaka, organes de souris/rat, etc.).
Sélection de Cubes de Filtre Fluorescent
En plus de tenir compte des longueurs d'onde d'excitation et d'émission des sondes fluorescentes, la sélection des blocs de filtre doit également tenir compte de l'existence d'une excitation non spécifique et d'une couleur croisée pour les échantillons marqués multicolores. Dans l'expérience, nous essaierons de choisir la longueur d'onde la plus proche du pic d'excitation pour l'excitation, et la plage de réception doit inclure le pic d'émission. Par exemple, le pic d'excitation d'Alexa Fluor 488 est de 500 nm et un filtre d'excitation 480/40 peut être sélectionné dans un microscope à fluorescence. Les cubes de filtres de fluorescence couramment utilisés dans les microscopes à fluorescence peuvent être divisés en deux types : passe-long (LP en abrégé) et passe-bande (BP en abrégé), qui doivent également être sélectionnés en fonction des besoins.
Choix de la source de lumière fluorescente
Les sources lumineuses fluorescentes actuellement couramment utilisées comprennent les lampes au mercure, les lampes aux halogénures métalliques et les sources lumineuses à LED qui se sont développées rapidement ces dernières années. Le spectre de la source de lumière fluorescente est continu et discontinu, et l'énergie sera différente dans différentes bandes. En raison de sa bande spectrale relativement étroite, de sa production d'énergie plus stable, de sa longue durée de vie, de sa sécurité et de sa protection de l'environnement et de nombreux autres avantages, la source de lumière LED devient progressivement la principale source de lumière du microscope à fluorescence.
microscope confocal
Dans l'observation au microscope à fluorescence traditionnelle, en raison du chevauchement des substances marqueurs fluorescentes et des structures d'autofluorescence, elles sont étroitement combinées, tandis que l'objectif du microscope à épifluorescence traditionnel recueille non seulement la lumière du plan focal, mais recueille également la lumière diffusée au-dessus et au-dessous du plan focal, ce qui réduit considérablement la résolution et le contraste de l'image.
L'imagerie confocale résout ce problème en ne détectant que la partie de la lumière réfléchie par le plan focal. La source lumineuse passe à travers un trou d'épingle pour former une petite et fine tache lumineuse sur le plan focal. La lumière émise depuis le plan focal est collectée par l'objectif. La majeure partie de la fluorescence émise à partir du point au-dessus ou au-dessous du plan focal de l'objectif ne peut pas converger vers le petit trou. Seule la fluorescence située dans le plan focal et une petite partie de la fluorescence hors foyer peuvent traverser le sténopé, tandis que les faisceaux lumineux à l'extérieur du plan focal convergent à l'avant ou à l'arrière de la plaque à sténopé et sont empêchés d'entrer dans le détecteur par le sténopé. L'image détectée est l'image du plan focal, la qualité de l'image finale est donc grandement améliorée.
En raison des avantages et de la praticabilité des fonctions du microscope confocal à balayage laser, le microscope confocal est un assistant expérimental indispensable dans le domaine de la biologie cellulaire de haute précision, de la botanique et de la recherche cellulaire. Dans le même temps, dans le futur centre de recherche scientifique, ce sera l'outil de recherche scientifique le plus fondamental et le plus central.
