Comment préparer des échantillons au microscope électronique
Les principales méthodes de préparation des échantillons d’observation pour la microscopie électronique à transmission sont :
1. Méthode de projection
Sous vide, des atomes de métaux lourds dotés d’une forte capacité de diffusion des électrons sont utilisés pour pulvériser la surface de l’échantillon. Cela forme un fort contraste entre l'échantillon et la zone non pulvérisée, et la partie non pulvérisée devient la projection de l'échantillon. Selon la projection, nous pouvons comprendre la forme tridimensionnelle et la hauteur de l'échantillon. Cette méthode est généralement utilisée pour observer des flagelles bactériens ou des particules virales.
2. Méthode de coloration négative
Étant donné que cette méthode colore l’arrière-plan de l’échantillon pour mettre en évidence l’échantillon, on l’appelle coloration négative. Généralement, l'échantillon est entouré de substances à haute densité électronique qui ne présentent aucune structure et ne réagissent pas avec l'échantillon, comme le sel de sodium de l'acide phosphotungstique. Dans le même temps, le colorant est également introduit à l’intérieur de l’objet d’observation. De cette façon, il peut non seulement afficher la forme, mais également refléter dans une certaine mesure la structure interne de l'échantillon. Les cellules bactériennes, les virus, etc. peuvent être observés grâce à cette méthode.
3. Méthode de coupe ultra fine
Il s’agit de la méthode la plus couramment utilisée car elle permet de visualiser de fines structures à l’intérieur de cellules ou d’autres échantillons. Habituellement, l'échantillon doit être fixé et déshydraté selon une certaine procédure, puis incorporé dans de la résine comme support et découpé en tranches extrêmement fines à l'aide d'un ultramicrotome. Étant donné que seules des tranches d'une épaisseur de 20 à 100 nanomètres peuvent être observées au microscope électronique à transmission, dans les échantillons bactériens en général, une cellule doit être divisée en 10 à 50 morceaux.
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