Méthodes d'imagerie du champ-clair et du-champ sombre en microscopie à fluorescence
(1) Méthode d'imagerie en champ clair (BFI), qui permet uniquement au faisceau d'électrons transmis dans la région paraxiale de traverser l'ouverture de l'objectif, formant une image sombre sur un fond clair. Plus l'ouverture de l'objectif est petite, plus le contraste de l'image en champ clair est grand ; (2) L'imagerie en champ sombre (DFI) est une technique qui permet à seulement une partie du faisceau diffusé à grand angle ou à un certain faisceau de diffraction du cristal de passer à travers l'ouverture de l'objectif, tout en bloquant le faisceau transmis. Cela forme une image graphique lumineuse sur un fond sombre. Cette méthode d’imagerie en champ sombre peut améliorer le contraste des images et constitue une technique d’imagerie importante.
Il existe environ quatre méthodes pour obtenir des images en champ sombre à l'aide de microscopes à fluorescence Leica : (1) maintenir l'éclairage vertical le long de l'axe optique tout en déplaçant l'ouverture de l'objectif ; (2) L'utilisation d'un éclairage oblique pour capturer des faisceaux diffusés dans la direction de l'axe optique est appelée Central Dark Field Imaging (CDFI) ; (3) Une ouverture d'objectif avec un arrêt de faisceau central et une zone transparente circulaire ; (4) Utilisez une lentille condensatrice transparente circulaire pour la détection de la lumière et une ouverture circulaire centrale pour l'objectif. La méthode * ici est la plus simple, mais elle utilise l'imagerie électronique dans la zone distale du manchon, donc l'aberration est importante et la qualité de l'image n'est pas très bonne. La deuxième méthode peut éviter les inconvénients ci-dessus, mais l'ouverture de l'objectif du microscope à fluorescence Leica ne reçoit qu'une petite partie des électrons diffractés et dispersés, ce qui entraîne une efficacité moindre. Le côté de l’ouverture est souvent soumis à un bombardement électronique important, ce qui peut facilement provoquer une contamination asymétrique et affecter la qualité de l’image. La lentille d'objectif annulaire a été améliorée sous cet aspect, mais l'inconvénient est qu'elle est difficile à produire et qu'il est difficile d'obtenir une symétrie axiale complète. Compte tenu des exigences relativement souples en matière de système d'éclairage, cette dernière solution peut être adoptée, qui consiste à ajouter une ouverture annulaire au niveau du condenseur pour fournir un éclairage par faisceau creux à l'échantillon. L'effet de cet appareil. Sa résolution d’image peut être proche de celle des images en champ clair, tandis que le contraste est grandement amélioré.
