Avantages améliorés de la microscopie multiphotonique à balayage laser
La microscopie multiphotonique à balayage laser est une amélioration majeure de la microscopie optique, principalement pour observer la structure profonde des cellules vivantes, des cellules fixes et des tissus, et peut obtenir des structures de plan Z multicouches claires et nettes, c'est-à-dire des tranches optiques, et peut construire La structure solide tridimensionnelle de l'échantillon. Le microscope confocal utilise une source de lumière laser, qui est élargie pour remplir tout le plan focal arrière de l'objectif, puis converge en un très petit point sur le plan focal de l'échantillon à travers le système de lentille de l'objectif. En fonction de l'ouverture numérique de l'objectif, le diamètre du point d'éclairage le plus brillant est d'environ 0.25 ~ 0.8 μm, et la profondeur est d'environ 0.5 ~ 1.5 μm. La taille de la tache confocale dépend de la conception du microscope, de la longueur d'onde du laser, des caractéristiques de l'objectif, du réglage d'état de l'unité de balayage et de la nature de l'échantillon. Les microscopes de terrain ont une large plage d'éclairage et une grande profondeur d'éclairage, tandis que les microscopes confocaux ont un éclairage concentré en un point focal sur le plan focal. L'avantage le plus fondamental de la microscopie confocale est qu'elle peut effectuer une coupe optique fine d'échantillons fluorescents épais (jusqu'à 50 μm ou plus), avec une épaisseur d'environ 0,5 à 1,5 μm. Une série d'images de section optique peut être obtenue en déplaçant l'échantillon de haut en bas avec le moteur pas à pas de l'axe Z du microscope. L'acquisition des informations d'image est contrôlée dans le plan et ne sera pas perturbée par des signaux provenant d'autres emplacements sur l'échantillon. Après avoir supprimé l'effet de la fluorescence de fond et augmenté le rapport signal sur bruit, le contraste et la résolution des images confocales sont considérablement améliorés par rapport aux images de fluorescence d'éclairage de champ traditionnelles. Dans de nombreux spécimens, de nombreux composants structurels complexes sont entrelacés pour former des systèmes complexes, mais une fois que suffisamment de sections optiques peuvent être collectées, nous pouvons les reconstruire en 3D grâce à un logiciel. Cette approche expérimentale a été largement utilisée dans la recherche biologique pour élucider les relations structurelles et fonctionnelles complexes entre les cellules ou les tissus.
