Avantages améliorés du microscope multiphotonique à balayage laser
Le microscope multiphotonique à balayage laser est une amélioration importante du microscope optique, qui montre principalement qu'il peut observer la structure profonde des cellules vivantes, des cellules fixes et des tissus, et peut obtenir une structure multicouche claire et nette en plan Z, c'est-à-dire des tranches optiques. , qui peut être utilisé pour construire la structure solide tridimensionnelle des spécimens. Le microscope confocal utilise une source de lumière laser, qui remplit tout le plan focal arrière de l'objectif après expansion, puis traverse le système de lentilles de l'objectif pour converger vers de très petits points sur le plan focal de l'échantillon. Selon l'ouverture numérique de l'objectif, le diamètre du point d'éclairage le plus brillant est d'environ 0,25 ~ 0,8 μm et la profondeur est d'environ 0,5 ~ 1,5 μ m .. La taille du foyer de copolymérisation dépend de la conception du microscope, de la longueur d'onde du laser, des caractéristiques de l'objectif, du réglage de l'état de l'unité de balayage et des propriétés de l'échantillon. La plage d'éclairage et la profondeur de champ du microscope sont très grandes, tandis que l'éclairage du microscope confocal est concentré sur un * * foyer du plan focal. L'avantage le plus fondamental du microscope confocal est qu'il peut réaliser de fines tranches optiques d'échantillons fluorescents épais (pouvant atteindre 50 μm ou plus), et l'épaisseur des tranches est d'environ 0,5 à 1,5 μm. Une série d’images de tranches optiques peut être obtenue en déplaçant l’échantillon de haut en bas grâce au moteur pas à pas de l’axe Z du microscope. L'acquisition des informations d'image est contrôlée dans le premier plan et ne sera pas perturbée par les signaux provenant d'autres positions sur l'échantillon. Après avoir supprimé l'influence de la fluorescence de fond et augmenté le rapport signal/bruit, le contraste et la résolution de l'image confocale sont évidemment améliorés par rapport à l'image de fluorescence d'éclairage de champ traditionnelle. Dans de nombreux spécimens, de nombreux composants structurels complexes sont entrelacés pour former un système complexe, mais une fois que suffisamment de sections optiques peuvent être collectées, nous pouvons les reconstruire en trois dimensions par logiciel. Cette méthode expérimentale a été largement utilisée dans la recherche biologique pour clarifier la relation structurelle et fonctionnelle complexe entre les cellules ou les tissus.
