Introduction aux avantages et inconvénients de la microscopie laser multiphotonique à balayage
1. En utilisant la lumière rouge ou la lumière infrarouge pour exciter, la diffusion de la lumière est faible et la diffusion des petites particules est inversement proportionnelle à la quatrième puissance de la longueur d'onde.
2. Des photons plus dispersés à partir de la section transversale d’imagerie peuvent être collectés sans avoir besoin de trous d’épingle.
3. Le sténopé ne peut pas distinguer les photons diffusés émis par la zone défocalisée ou la zone de mise au point, et le rapport signal/bruit de l'imagerie multiphotonique dans les couches profondes est bon.
4. La lumière ultraviolette ou visible utilisée pour l'excitation monophotonique est facilement absorbée et atténuée par l'échantillon avant que le faisceau n'atteigne le plan focal, et il est difficile d'exciter les couches profondes.
5. En termes d'observation au microscope biologique, la première considération est de ne pas endommager l'état actif de l'organisme lui-même et de maintenir le flux d'eau, la concentration d'ions, l'oxygène et les nutriments. Dans le cas de l'observation de la lumière, la chaleur et l'énergie photonique doivent rester dans la quantité d'irradiation et l'énergie lumineuse pour que les cellules ne soient pas endommagées.
6. La microscopie multiphotonique présente de nombreux avantages. Telles que la résolution tridimensionnelle, la pénétration en profondeur, l'efficacité de diffusion, la lumière de fond, le rapport signal/bruit, le contrôle, etc., présentent toutes des caractéristiques que les microscopes laser précédents n'avaient pas ou ne pouvaient pas comparer.
Inconvénients de la microscopie laser multiphotonique à balayage :
1. Il ne peut imager que la fluorescence.
2. Si l'échantillon contient des chromophores qui absorbent la lumière d'excitation, l'échantillon peut être thermiquement endommagé.
3. La résolution est légèrement réduite. Bien que cela puisse être amélioré en utilisant des trous confocaux en même temps, il y a une perte de signal.
4. Limité par les coûteux lasers ultrarapides, le coût des microscopes à balayage multiphotonique est relativement élevé.
