Mesure de la quantité microbienne – Méthode de comptage microscopique direct !
La croissance des populations bactériennes se caractérise par une augmentation du nombre de cellules ou une augmentation du matériel cellulaire. Il existe plusieurs méthodes pour mesurer le nombre de cellules, notamment la numération microscopique directe, la numération sur plaques, la turbométrie par spectrophotomètre, le nombre le plus probable MPN et la filtration sur membrane. Les méthodes de mesure des substances cellulaires comprennent la mesure du poids sec des cellules, la mesure de la teneur en certains composants cellulaires tels que l'azote, l'ARN et l'ADN, et la mesure des produits métaboliques. En résumé, il existe de nombreuses méthodes pour mesurer la croissance microbienne, chacune ayant ses propres avantages et inconvénients, et le choix doit être basé sur les exigences spécifiques du travail. Cette expérience présente principalement la méthode de comptage direct au microscope couramment utilisée dans les travaux de production et de recherche scientifique.
Exigences liées à l'objectif
1. Clarifier le principe de l'utilisation d'une planche de comptage de cellules sanguines pour le comptage.
2. Maîtrisez la méthode d'utilisation d'une planche de comptage de cellules sanguines pour le comptage microbien.
2, principes de base
La méthode de comptage microscopique direct est une méthode simple, rapide et intuitive permettant de compter directement une petite quantité de suspension d'un échantillon au microscope en la plaçant sur une lame de verre spéciale d'une certaine surface et d'un certain volume (également appelée compteur bactérien). À l'heure actuelle, les appareils de comptage bactérien couramment utilisés dans le pays et à l'étranger comprennent les plaques de comptage de cellules sanguines, les appareils de comptage bactérien Peteroff Hauser et les appareils de comptage bactérien Hawksley, qui peuvent tous être utilisés pour compter les suspensions de levures, de bactéries, de spores fongiques, etc. avec le même principe de base. Les deux derniers types de compteurs bactériens ont un volume total de {{0}},02 mm3 après avoir été recouverts d'un verre de protection, et la distance entre le verre de protection et la lame porteuse n'est que de 0,02 mm. Par conséquent, un objectif à immersion dans l’huile peut être utilisé pour observer et compter des cellules plus petites telles que des bactéries. Outre l'utilisation de ces compteurs bactériens, il existe également une méthode d'estimation permettant d'observer directement le rapport entre la surface du frottis et la surface du champ au microscope, généralement utilisée pour l'examen bactériologique du lait. Les avantages du comptage direct avec un microscope sont intuitifs, rapides et faciles à utiliser. Mais l’inconvénient de cette méthode est que les résultats mesurés sont généralement la somme des cellules mortes et vivantes. À l'heure actuelle, certaines méthodes peuvent surmonter cet inconvénient, telles que la combinaison d'une culture en chambre de coloration de cellules vivantes (courte durée) et l'ajout d'inhibiteurs de division cellulaire pour atteindre l'objectif de compter uniquement les cellules vivantes.
Utiliser une planche de comptage de cellules sanguines comme exemple pour un comptage direct au microscope. Les méthodes d'utilisation des deux autres compteurs bactériens se trouvent dans les manuels de différents fabricants. Le comptage direct au microscope à l’aide d’une plaque de comptage de cellules sanguines est une méthode couramment utilisée pour le comptage microbien. Le tableau de comptage est une lame de verre spécialement conçue avec quatre rainures formant trois plates-formes ; La plate-forme plus large au milieu est divisée en deux moitiés par une courte rainure horizontale, et il y a une grille de chaque côté de la plate-forme. Chaque grille est divisée en neuf grandes grilles, et la grande grille du milieu est la salle de comptage. La structure de la plaque de comptage des cellules sanguines est représentée sur la figure l{{0}}. L'échelle de la salle de comptage a généralement deux spécifications. La première est qu'un grand carré est divisé en 25 carrés du milieu, et chaque carré est ensuite divisé en 16 petits carrés (Figure 15-2) ; Une autre méthode consiste à diviser un grand carré en 16 carrés du milieu, et chaque carré est ensuite divisé en 25 petits carrés. Cependant, quelle que soit la taille du plateau de comptage, il y a 400 petits carrés dans chaque grand carré. Si la longueur du côté de chaque carré est de 1 mm, l’aire de chaque grand carré est de 1 mm2. Après recouvrement avec un couvre-objet, la hauteur entre le couvre-objet et la lame est de 0,1 mm, donc le volume de la salle de comptage est de 0,1 mm3 (un millième de millilitre). Figure 15-1 Structure du tableau de comptage des cellules sanguines (I) Figure 15-2 Structure du tableau de comptage des cellules sanguines (II) A Vue de face ; B. Vue en coupe verticale ; La grille agrandie comporte un grand carré au milieu comme salle de comptage 1. Tableau de comptage des cellules sanguines ; 2. Verre de couverture ; Lors du comptage en salle de comptage, la numération bactérienne totale est généralement calculée pour cinq carrés, puis la valeur moyenne de chaque carré est obtenue, multipliée par 25 ou 16 pour obtenir la numération bactérienne totale dans un grand carré, qui est ensuite convertie en nombre total de bactéries dans la solution bactérienne de 1 ml. En supposant que le nombre total de bactéries dans cinq grilles carrées est A et que le facteur de dilution de la solution bactérienne est B. S'il y a 25 plaques de comptage dans la grille carrée, le nombre total de bactéries dans 1 ml de solution bactérienne est A/5 × 25 × 104. × B=50000A · B. De même, s'il y a 16 plaques de comptage dans la grille carrée, le nombre total de bactéries dans 1 ml de solution bactérienne est A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
