Salle de classe d'imagerie microscopique 丨 Microscope à fluorescence à champ large
Dans les applications d'imagerie de cellules vivantes, la microscopie à fluorescence à champ large facilite l'observation de la dynamique des cellules adhérentes cultivées dans des chambres environnementales spécifiques placées sur la platine du microscope. Dans sa configuration la plus basique, un microscope de culture tissulaire inversé standard équipé d'un éclairage de fluorescence EPI est couplé à un système de détecteur de zone (généralement une caméra CCD), des filtres de fluorescence appropriés et un système d'obturation pour limiter l'exposition excessive des cellules à la lumière d'excitation nocive. . La microscopie à fluorescence de base repose sur des filtres interférentiels soigneusement adaptés pour sélectionner des largeurs de bande spécifiques pour l'éclairage et la détection de la lumière émise. Les sources lumineuses comprennent les lampes à arc au mercure, au xénon et aux halogénures métalliques, les systèmes laser à expansion de faisceau et les diodes électroluminescentes (DEL), qui nécessitent toutes des spécifications de filtre différentes. Les fluorophores synthétiques utilisés en microscopie à fluorescence ont des spectres d'émission couvrant les régions du proche ultraviolet, du visible et du proche infrarouge. L'utilisation de protéines fluorescentes génétiquement codées a considérablement élargi les capacités de la microscopie à fluorescence dans l'imagerie des cellules vivantes, permettant aux chercheurs de cibler avec précision les régions subcellulaires d'intérêt.
Nuohai LS 18, un nouveau type de microscope à éclairage à feuille de lumière développé indépendamment par Nuohai, est spécialement conçu pour l'imagerie 3D haute résolution de grands échantillons de tissus transparents, et est dédié à l'exploration de divers tissus intacts tels que le cerveau, la rate, l'intestin grêle , rein, poumon, cœur et tumeur. Structure précise en 3D des organes.
En fluorescence à champ large, l'émission à pleine ouverture collectée par l'objectif du microscope maximise le signal enregistré tout en minimisant le temps d'exposition requis. Ainsi, les échantillons peuvent être imagés avec des périodes lumineuses très courtes. Le principal inconvénient de l'imagerie à champ large est que la fluorescence des régions éloignées du plan focal, ainsi que le signal de fond, est une lumière indésirable qui obscurcit souvent les caractéristiques d'intérêt. Par conséquent, l'imagerie à champ large donne les meilleurs résultats lorsque les caractéristiques d'intérêt sont grandes (telles que les organites) ou de nature très ponctuée. Une grande variété d'échantillons de cellules vivantes, y compris des cellules adhérentes, des bactéries, des levures et des coupes de tissus très minces, sont des candidats idéaux pour l'imagerie par fluorescence à champ large, cependant, les tissus plus épais (plus de 5 microns) sont mieux utilisés avec une méthode d'imagerie plus avancée.
Bien qu'il y ait eu de nombreux progrès dans l'imagerie fluorescente avec des colorants fluorescents synthétiques, des points quantiques et des protéines fluorescentes, dans certains cas, il est utile de combiner la fluorescence avec d'autres modalités d'imagerie. Par exemple, le DIC peut être utilisé en conjonction avec la fluorescence à champ large pour surveiller la viabilité cellulaire et la morphologie générale tout en étudiant les phénomènes d'intérêt pour des cibles marquées spécifiques. L'acquisition de DIC et de fluorescence dans une seule image n'est généralement pas pratique, mais dans un microscope correctement configuré, les deux techniques peuvent être utilisées séquentiellement. Ainsi, après imagerie en mode épifluorescence, les images DIC peuvent être acquises à partir d'échantillons marqués par fluorescence en utilisant la lumière transmise. Les deux images peuvent être fusionnées lors de la post-analyse. L'acquisition simultanée d'images DIC et de fluorescence est possible dans des configurations de microscope à champ large avancées utilisant un éclairage séparé spectralement (comme le visible et le proche infrarouge) et des adaptateurs de caméra à double caméra ou à vue partagée. Dans la plupart des microscopes confocaux à balayage laser, les images peuvent être acquises simultanément en modes fluorescence et DIC, éliminant ainsi le besoin de traitement post-acquisition. Le contraste de phase et le contraste de modulation Hoffman peuvent également être utilisés en conjonction avec la microscopie à fluorescence à champ large. Cependant, dans ces techniques, l'objectif est spécial, qu'il s'agisse d'un anneau de phase ou d'une plaque de modulation Hoffman, il entraînera une perte d'intensité d'émission de 5-15 pour cent .
Lien de l'article : Instrument Equipment Network https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
