Exigences d'épaisseur de microscope optique pour les lames de verre
Déshydratation microscopique et fixation d'échantillon : en raison de la centrifugation répétée, les cellules sont perdues, il est donc préférable de fixer les cellules à la surface d'une lame de verre ou d'une feuille de plastique pour la microscopie optique, afin que les cellules soient déshydratées et séchées avec le verre lame ou feuille de plastique. Exigences relatives à l'épaisseur des lames de verre en microscopie optique Afin de permettre aux cellules de se fixer sur des lames de verre ou des feuilles de plastique, il faut d'abord déposer une couche de film sur des lames de verre ou des feuilles de plastique. La méthode de pose du film est la suivante :
(1) La méthode la plus simple pour la microscopie optique consiste à déposer une fine couche de film polyvinyl formal (formvar). Faire tremper les lames nettoyées dans (0.5-1) pour cent de solution de chloroforme de formal polyvinyle. Après volatilisation de l'atmosphère, un film blanc apparaît sur les lames. Agiter plusieurs fois les lames dans le chloroforme pour faire changer le film. Fin et prêt à l'emploi.
(2) Déposez 0.1 latitude poly-L-lysine (dissolvez 1 mg de poly-lysine dans 1 ml d'eau filtrée pendant la préparation) sur la lame de verre nettoyée et placez-la dans une boîte d'alimentation à 450 ° C après que la goutte se soit déroulée . sec. Cette méthode est la meilleure car la poly-L-lysine est chargée positivement, ce qui permet à plus de cellules chargées négativement de surface de se fixer.
(3) Ajouter du plasma et du glycérol à de l'eau distillée dans un rapport de (30--40) % et (3-5) % selon les exigences du microscope optique pour l'épaisseur de la lame pour former une protéine de glycérol solution. Le liquide est déposé sur la lame de verre nettoyée, dépliée et séchée au microscope optique. Le film protéique étendu est immergé dans 2% de glutaraldéhyde pour fixer la protéine, lavé et séché pour une utilisation ultérieure. Avant utilisation, le plasma est déposé sur le film protéique. Rendez-le "activé", rincez avec un tampon après 30 minutes, et il peut être appliqué directement.
Les cellules fixées et nettoyées sont transformées en une concentration appropriée de suspension cellulaire avec de l'eau filtrée sous un microscope numérique, et le microscope optique est placé sur une lame de verre ou une feuille de plastique qui a été recouverte d'une membrane, et placée dans un endroit humide, à basse température. température (40C) environnement (30-120) minutes pour permettre aux cellules de se fixer à la membrane. Utilisez une pince à épiler fine pour ramasser la lame de verre et secouez-la dans de l'eau distillée double propre, et lavez les cellules non attachées avec un microscope optique. Exigences relatives à l'épaisseur des lames dans les microscopes optiques Les microscopes polarisants sont ensuite rapidement placés dans un récipient rempli à 50 % d'acétone (ou d'éthanol). Le processus de déshydratation consiste à mettre les lames dans de l'acétone ou de l'éthanol avec une concentration croissante toutes les 3 minutes, et au microscope optique ou d'augmenter en continu la concentration de l'agent déshydratant dans le récipient à lames de verre. Selon l'expérience de laboratoire de l'auteur, cette dernière opération est plus pratique. La méthode spécifique de microscopie optique peut aspirer la moitié de l'agent déshydratant dans le récipient toutes les 3 minutes, puis ajouter une quantité égale d'agent déshydratant avec une concentration de 100 %. Après 5-6 opérations, la concentration de l'agent déshydratant dans le récipient de prix du microscope atteint plus de 0,5 % et les cellules sont déshydratées avec succès. Après séchage au point critique, la lame de verre ou la feuille de plastique est collée sur le support d'échantillon avec un adhésif conducteur pour revêtement métallique. Il existe également des commodités pour attacher des cellules à des membranes établies par la troisième méthode. Le microscope optique permet d'accrocher les cellules fixées par une faible concentration de glutaraldéhyde sur le film protéique "activé". Le microscope optique nécessite que l'épaisseur de la lame de verre soit placée pendant 10 minutes, et la lame de verre ou la feuille de plastique est trempée dans 2% de glutaraldéhyde. Après 30 minutes, rincer avec de l'eau bidistillée filtrée, puis déshydrater, sécher et recouvrir de métal selon la méthode ci-dessus.
