PH mètre - Détermination et réglage du pH du milieu
Tous les micro-organismes sont affectés par le pH de l'environnement dans lequel ils vivent. Souvent, la présence d'espèces sélectives réduit la plage de pH dans laquelle elles poussent. Parfois, l'acidité ou l'alcalinité du milieu peut également agir comme facteur de sélection de la croissance. Pour les milieux de test biochimiques, cependant, la plage de pH dans laquelle les micro-organismes présentent une activité tk dans le substrat est plus étroite que la plage de pH requise pour la croissance : par conséquent, il est important d'ajuster le pH du milieu à la plage attendue. Lorsque le laboratoire prépare le milieu selon la composition du milieu, le pH doit être contrôlé et ajusté. Il faut souligner que même pour le milieu déshydraté synthétique prêt à l'emploi fourni par le fabricant (en particulier pour certains milieux déshydratés de base), le pH final doit être mesuré après la fabrication du milieu expérimental.
Le moyen le plus précis de mesurer le pH d'un milieu est d'utiliser un pH-mètre. Avant utilisation, il doit être calibré avec une solution tampon standard de pH connu (habituellement le pH est de 4 à 7). Rincer l'électrode du pH-mètre avec de l'eau distillée et la plonger dans le milieu de culture dans le bécher, puis lire le pH du milieu de culture à partir de l'échelle du pH-mètre. Chaque fabricant fournit des instructions d'utilisation détaillées pour chaque type de pH-mètre.
Lors de la préparation du milieu de culture, le PH peut être facilement ajusté à l'aide d'un pH-mètre avec agitation mécanique. Le milieu de culture doit être préparé dans un récipient (comme un grand bécher) qui peut être agité en continu. ou des aimants enveloppés de téflon. Le pH du milieu contenant de l'agar doit être ajusté après la décongélation, ce qui se fait facilement avec un agitateur magnétique chauffant. Lors du réglage du pH, utilisez d'abord une solution tampon standard de pH connu pour calibrer le pH-mètre. Ensuite, placez l'électrode composite et le thermomètre à résistance (le cas échéant) dans le milieu, ajoutez lentement la quantité appropriée d'acide chlorhydrique et d'hydroxyde de sodium à partir de l'extrémité du bécher loin de l'électrode, de sorte que le milieu puisse atteindre et maintenir le pH requis.
La compensation de température du pH-mètre doit tenir compte de l'effet de la température sur le système d'électrodes : dans certaines dilutions et milieux, le pH change considérablement avec la température. Pour les milieux liquides et les dilutions, le pH peut généralement être ajusté et mesuré soit à 25 degrés, soit à la température à laquelle ils sont utilisés.
Le pH du milieu gélosé doit être ajusté après dissolution, et la température de dissolution est supérieure à 45 degrés : par conséquent, le pH du milieu solide doit être déterminé à sa température d'utilisation. À ce stade, une électrode composite à tête plate doit être utilisée et la compensation de température du pH-mètre doit être calibrée manuellement. Lors de la préparation du milieu de culture, s'il est déterminé que le pH du milieu de culture est différent entre l'état de fusion et l'état de solidification, cela signifie qu'il y a une erreur d'ajustement du pH.
De même, lorsque le milieu préparé est stérilisé à la chaleur (par exemple, autoclavé), il peut également subir des changements de pH. Pour le milieu déshydraté, le fabricant a pris cela en considération et il n'est généralement pas nécessaire d'ajuster le pH, mais le pH du milieu à utiliser doit être soigneusement vérifié. Si le pH du milieu gélosé déshydraté doit être ajusté lors de la redissolution ou de la préparation, il est préférable de l'ajuster avec de l'acide chlorhydrique stérilisé sur filtre et une solution d'hydroxyde de sodium après l'étape de stérilisation pour éviter la formation d'une surchauffe du milieu. Lors de la préparation de milieux avec différentes matières premières ou produits pharmaceutiques, le pH des milieux doit être vérifié après l'autoclavage. De plus, si le pH du milieu change de la même manière après chaque autoclave, le pH peut être ajusté de manière appropriée lors de la préparation du milieu. Cependant, il est encore nécessaire de déterminer le pH final du milieu après stérilisation.
