Préparation et observation d'échantillons biologiques pour la microscopie électronique
La résolution d'un microscope dépend de la longueur d'onde de la lumière utilisée. Le microscope électronique, qui a commencé à apparaître en 1933, utilise comme source de lumière un faisceau d'électrons d'une longueur d'onde beaucoup plus courte que celle de la lumière visible, de sorte que la résolution qu'il peut atteindre est considérablement améliorée par rapport à celle d'un microscope optique. La différence entre les sources lumineuses détermine également une série de différences entre les microscopes électroniques et les microscopes optiques.
Selon les différences dans les principes de l'imagerie par faisceau électronique et les différentes manières d'agir sur les échantillons, les microscopes électroniques modernes se sont développés en de nombreux types. Actuellement, les microscopes électroniques à transmission et les microscopes électroniques à balayage sont les plus couramment utilisés. Le grossissement total du premier peut être compris entre 1000-1000000. Le grossissement total de ce dernier peut varier entre 20 et 300,000 fois. Cette expérience introduit principalement la préparation de deux types d'échantillons au microscope, le microscope électronique à transmission et le microscope électronique à balayage.
2. Équipement
1. Bactéries Escherichia coli (Escherichia coli) inclinées.
2. Solution ou réactif acétate d'amyle, acide sulfurique concentré, éthanol absolu, eau stérile, solution aqueuse à 2 % de phosphotungstate de sodium (pH 6.5-8.0), 0,3 % de polyéthylène Solution de formaldéhyde (soluble dans le chloroforme), cellules Pigment c, acétate d'ammonium, plasmide pBR322.
3. Instruments ou autres ustensiles : microscope optique ordinaire, maille de cuivre, entonnoir en porcelaine, bécher, plat, compte-gouttes stérile, pincettes stériles, épingles, lames, planche de comptage, machine de revêtement sous vide, séchoir de point critique, etc.
3. Étapes de fonctionnement
(1) Préparation et observation d'échantillons pour la microscopie électronique à transmission
1. Traitement du treillis métallique
L'échantillon destiné à la microscopie optique est placé sur une lame de verre pour observation. Cependant, en microscopie électronique à transmission, étant donné que les électrons ne peuvent pas pénétrer dans la feuille de verre, les matériaux maillés ne peuvent être utilisés que comme supports, généralement appelés filets porteurs. Le treillis porteur peut être divisé en de nombreuses spécifications différentes en raison de différents matériaux et formes, parmi lesquels le plus couramment utilisé est le treillis en cuivre à 200-400 maille (nombre de trous). Le treillis en cuivre doit être traité avant utilisation pour éliminer la saleté et le garder propre, sinon cela affectera la qualité du film support et la clarté des photos des échantillons. Cette expérience utilise un maillage en cuivre 400-, qui peut être traité comme suit : d'abord, trempez-le et blanchissez-le avec de l'acétate d'amyle pendant plusieurs heures, puis rincez-le plusieurs fois avec de l'eau distillée, puis trempez-le dans de l'éthanol absolu pendant déshydratation. Si le treillis en cuivre n'est toujours pas propre après les méthodes ci-dessus, vous pouvez le tremper dans de l'acide sulfurique concentré dilué (1:1) pendant 1 à 2 minutes, ou le faire bouillir dans une solution de NaOH à 1 % pendant quelques minutes, le rincer avec de l'eau distillée. arrosez plusieurs fois, puis mettez-le dans de l'eau anhydre, déshydratez-le dans de l'éthanol et réservez.
2. Préparation de la membrane de support
Lors de l’observation des échantillons, le filet porteur doit également être recouvert d’une couche de film uniforme et non structuré, sinon de petits échantillons s’échapperont des trous du filet porteur. Ce film est habituellement appelé film support ou film support. Le film de support doit être transparent aux électrons et son épaisseur doit généralement être inférieure à 20 nm ; sous l'impact du faisceau d'électrons, le film doit également avoir une certaine résistance mécanique pour maintenir la stabilité structurelle et avoir une bonne conductivité thermique ; de plus, le réseau de support doit être utilisé en microscopie électronique. Il ne doit y avoir aucune structure visible en dessous, aucune réaction chimique avec l'échantillon transporté et aucune interférence avec l'observation de l'échantillon. Son épaisseur est généralement d'environ 15 nm. Le film support peut être un film plastique (tel qu'un film de collodion, un film de polyéthylène formaldéhyde, etc.), un film de carbone ou un film métallique (tel qu'un film de béryllium, etc.). Dans des conditions normales de travail, le film plastique peut répondre aux exigences. Parmi les films plastiques, le film au collodion est relativement facile à préparer, mais sa résistance n'est pas aussi bonne que celle du film en polyéthylène formaldéhyde.
