Principes et caractéristiques structurelles de la microscopie à fluorescence
Le microscope à fluorescence utilise une efficacité lumineuse élevée de la source de lumière ponctuelle, via le système de filtrage des couleurs, pour émettre une certaine longueur d'onde de lumière (telle que l'ultraviolet 3650 ou le bleu-violet 4200) comme lumière d'excitation, l'excitation du matériau fluorescent à l'intérieur le spécimen émet une variété de couleurs différentes de fluorescence, puis grossi à travers l'objectif et les oculaires pour l'observation. De cette façon, dans un fond à fort contraste, même si la fluorescence est très faible, il est facile à identifier, haute sensibilité, principalement utilisé pour l'étude de la structure et de la fonction cellulaire et de la composition chimique. La structure de base d'un microscope à fluorescence est composée d'un microscope optique ordinaire et de quelques accessoires (tels qu'une source de lumière à fluorescence, des filtres d'excitation, un séparateur de faisceau bicolore et des filtres de blocage, etc.). Source de lumière fluorescente - lampe au mercure à ultra haute pression généralement utilisée (50-200 W), qui peut émettre une variété de longueurs d'onde de lumière, mais chaque matériau fluorescent a une longueur d'onde d'excitation de fluorescence la plus forte, il est donc nécessaire d'ajouter des filtres d'excitation (généralement filtre d'excitation ultraviolet, violet, bleu et vert), de sorte que seule une certaine longueur d'onde de la lumière d'excitation passe par l'irradiation des échantillons, tandis que l'autre lumière est absorbée. Il est donc nécessaire d'ajouter un filtre d'excitation (généralement des filtres d'excitation ultraviolets, violets, bleus et verts), de sorte que seule une certaine longueur d'onde de lumière d'excitation traverse l'échantillon, tandis que l'autre lumière est absorbée. Lorsque chaque substance est irradiée avec une lumière d’excitation, elle émet une fluorescence visible d’une longueur d’onde plus longue que celle de la lumière irradiée en très peu de temps. La fluorescence a une spécificité, généralement plus faible que la lumière d'excitation, afin de pouvoir observer la fluorescence spécifique, dans l'objectif, derrière la nécessité d'ajouter un filtre de blocage (ou de suppression).
Son rôle est double :
La première consiste à absorber et à bloquer la lumière d'excitation dans l'oculaire, afin de ne pas perturber la fluorescence et les lésions oculaires.
La seconde consiste à sélectionner et à laisser passer la fluorescence spécifique, montrant une couleur fluorescente spécifique. Les deux types de filtres doivent être sélectionnés et utilisés conjointement.
