Principes, caractéristiques et utilisation de la microscopie à fluorescence
Le principe et les caractéristiques structurelles d'un microscope à fluorescence : Un microscope à fluorescence utilise une source de lumière ponctuelle à haute efficacité lumineuse, qui émet une certaine longueur d'onde de lumière (telle que la lumière ultraviolette 3650 pouces ou la lumière bleue ultraviolette 4200 pouces) à travers un système de filtrage de couleur comme lumière d'excitation. La substance fluorescente présente dans l'échantillon est excitée pour émettre diverses couleurs de fluorescence, puis observée grâce au grossissement de l'objectif et de l'oculaire. De cette façon, même avec une faible fluorescence, il est facilement reconnaissable et très sensible sous des fonds fortement contrastés, principalement utilisés pour étudier la structure et la fonction cellulaire, ainsi que la composition chimique. La structure de base d'un microscope à fluorescence est composée d'un microscope optique ordinaire et de quelques accessoires (tels qu'une source de lumière fluorescente, un filtre d'excitation, un séparateur de faisceau bichromatique et un filtre de blocage, etc.). Sources de lumière fluorescente : utilisent généralement des lampes au mercure à ultra haute pression (50-200W), qui peuvent émettre de la lumière de différentes longueurs d'onde. Cependant, chaque substance fluorescente a une longueur d'onde de lumière d'excitation qui produit la fluorescence la plus forte, de sorte que des filtres d'excitation (généralement des filtres d'excitation ultraviolets, violets, bleus et verts) doivent être ajoutés pour permettre à seulement une certaine longueur d'onde de lumière d'excitation de passer à travers et d'éclairer. le spécimen, tout en absorbant toute autre lumière. Après avoir été irradiée par une lumière excitée, chaque substance émet une fluorescence visible avec une longueur d’onde plus longue que celle de l’irradiation sur une très courte période de temps. La fluorescence a une spécificité et est généralement plus faible que la lumière d'excitation. Afin d'observer une fluorescence spécifique, un filtre bloquant (ou supprimant) doit être ajouté derrière l'objectif.
Il a deux fonctions : premièrement, il absorbe et bloque la lumière d'excitation de pénétrer dans l'oculaire pour éviter de perturber la fluorescence et d'endommager les yeux ; deuxièmement, il sélectionne et laisse passer une fluorescence spécifique, affichant une couleur de fluorescence spécifique. Les deux types de filtres doivent être sélectionnés pour être utilisés ensemble.
