Avantages et inconvénients de la microscopie à balayage laser multiphotonique
La microscopie à balayage laser multiphotonique est une méthode expérimentale basée sur la technologie du microscope à balayage laser, qui offre une plus grande capacité de coupe optique en observation 3D. La méthode d'excitation par fluorescence multiphotonique utilise de longues longueurs d'onde de lumière rouge ou proche infrarouge pour acquérir des images fluorescentes haute résolution d'échantillons avec une destruction minimale des échantillons actifs, ce qui la rend adaptée à l'imagerie de cellules vivantes, en particulier de tissus vivants épais tels que des tranches de cerveau, des embryons, des organes entiers et même des organismes entiers.
Les avantages sont les suivants :
1, l'utilisation de la lumière rouge ou de l'excitation de la lumière infrarouge, la diffusion de la lumière est faible(la dispersion depetitparticules et la longueur d'onde de la puissance quatrième du rapport inverse).
2, ne nécessite pas de trou d'épingle, peut collecter davantage de photons dispersés à partir de la section transversale d'imagerie.
3, le sténopé ne peut pas distinguer les photons diffusés émis par la région floue ou la zone focale, le rapport signal/bruit multi-photons dans l'imagerie profonde est bon.
4, excitation monophotonique de la lumière ultraviolette ou visible utilisée dans le faisceau pour atteindre le plan focal avant que l'échantillon ne soit facilement absorbé et atténué, pas facile à exciter en profondeur.
5, dans l'observation au microscope biologique, * la première considération est de ne pas endommager l'état actif de l'organisme lui-même, de maintenir la circulation de l'eau, de la concentration en ions, de l'oxygène et des nutriments. Lors d'observations lumineuses, l'énergie thermique et photonique doit rester dans la cellule sans endommager la quantité d'irradiation et l'énergie lumineuse.
6, le microscope multiphotonique présente également de nombreux avantages. Tels que la résolution tridimensionnelle, l'intrusion en profondeur, l'efficacité de diffusion, la lumière de fond, le rapport signal/bruit, le contrôle, etc., il existe des microscopes laser antérieurs qui n'ont pas ou ont des caractéristiques incomparables au-delà.
Le microscope confocal à balayage laser multiphotonique a été étendu à divers domaines de recherche et d'application. Il est capable d'observer en trois dimensions et de manière non destructive des échantillons dans leur état naturel et peut améliorer la résolution et le rapport signal/bruit du système. Grâce au changement des propriétés du matériau après une excitation multiphotonique, il est également possible de réaliser un stockage de données de hauteur tridimensionnelles et une microfabrication tridimensionnelle dans n'importe quelle direction, ce qui présente une valeur d'application élevée. On peut croire qu'avec le développement ultérieur des machines, des matériaux, de la technologie laser et d'autres technologies liées à la microscopie confocale multiphotonique, le microscope confocal à balayage laser multiphotonique connaîtra un développement plus important et une application plus large.
Les inconvénients sont les suivants :
1, seule imagerie par fluorescence.
2, si l'échantillon comprend des chromophores capables d'absorber la lumière d'excitation, tel quepigments, l'échantillonpeut être endommagé thermiquement.
3, la résolution est légèrement réduite, bien queil peut être amélioré par l'utilisation simultanée de l'ouverture confocale, maisil y aura une perte de signal.
4. Le coût de la microscopie à balayage multiphotonique est élevé en raison des limitations des lasers ultrarapides coûteux.
