Exigences relatives à la préparation d'échantillons de routine pour la microscopie
Le microscope confocal est un nouveau produit de haute technologie d'époque développé dans les années 1980, et c'est l'un des instruments analytiques importants en biologie moléculaire et en sciences de la vie aujourd'hui. La microscopie confocale est basée sur l'imagerie au microscope à fluorescence avec un dispositif de balayage laser ajouté, utilisant un ordinateur pour le traitement d'image afin d'obtenir des images fluorescentes de la microstructure à l'intérieur des cellules ou des tissus, et pour observer les changements dans la morphologie de nombreuses machines à signaux physiologiques au niveau subcellulaire. Devenez un puissant outil de recherche dans les domaines de la morphologie, de la biologie cellulaire moléculaire, des neurosciences, de la pharmacologie, de la génétique et d'autres domaines scientifiques.
La préparation des échantillons pour la microscopie confocale est une étape critique avant la détection. Les échantillons doivent être marqués avec des sondes fluorescentes (simple, double, triple).
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Les spécimens peuvent être des tissus fixes ou vivants, ou des cultures adhérentes fixes ou vivantes. Les cellules doivent être cultivées sur de petites boîtes de culture ou des lamelles spéciales Confocal. Suspendre les cellules, secouer ou laisser tomber les tranches et couvrir avec un film de couverture de lamelles. L'épaisseur Zda de l'échantillon est d'environ 1 ~ 2 mm, l'épaisseur du verre de couverture utilisé doit être inférieure à 0 0,17 mm et l'épaisseur de la lame de verre doit être comprise entre 0 0,8 ~ 1,2 mm, et la surface est lisse, l'épaisseur est uniforme et il n'y a pas de fluorescence d'interférence évidente. Le milieu de montage est souvent utilisé pour les échantillons fixes, et le glycérol préparé dans du PBS avec un pH de 8.5-9 est couramment utilisé pour le montage.
Exigences de routine pour la préparation des échantillons :
1. Sélection des colorants
Étant donné que le microscope confocal utilise un laser à longueur d'onde unique comme source de lumière, le choix des colorants fluorescents doit être basé sur la longueur d'onde du laser équipé du microscope confocal. S'il y a plusieurs colorants fluorescents dans le même échantillon, leur longueur d'onde d'émission doit également être prise en compte autant que possible. Ne pas superposer pour éviter les problèmes de couleurs croisées.
2. Sélection du porte-échantillon
Généralement, la lentille d'objectif haute puissance du microscope confocal est une lentille à huile, son ouverture numérique est petite et la distance de travail entre la lentille et l'échantillon ne doit pas dépasser 0 0,17 mm. Les lames et les lamelles sont bien. S'il s'agit de cellules en suspension ou de particules en suspension, une boîte de pétri dédiée à un microscope confocal peut être utilisée pour transporter l'échantillon à observer.
3. Sélection du support de montage
Si l'échantillon n'a besoin d'être observé qu'une seule fois et que la fluorescence n'est pas facilement éteinte, vous pouvez choisir une certaine concentration de mélange de glycérol pour sceller la lame. Si l'échantillon doit être placé pendant une période de temps et pris plusieurs fois, un milieu de montage d'extinction anti-fluorescence doit être sélectionné pour réduire la perte de signaux fluorescents.
