Exigences pour la production d'échantillons pour le microscope à fluorescence
(1) Lame de verre
L'épaisseur de la diapositive doit être comprise entre 0,8 et 1,2 mm. Si la lame est trop épaisse, d’une part, elle absorbera plus de lumière et, d’autre part, elle ne permettra pas à la lumière d’excitation de se rassembler sur l’échantillon. La lame de verre doit être lisse, d’épaisseur uniforme et ne présenter aucune fluorescence spontanée évidente. Parfois, des lames en verre de quartz sont nécessaires.
(2) Lame de verre de protection
L'épaisseur du verre de protection est d'environ 0,17 mm et il est lisse. Afin d'améliorer la lumière d'excitation, un verre de protection interférentiel peut également être utilisé. Il s'agit d'un verre de protection spécialement conçu avec plusieurs couches de substances (telles que le fluorure de magnésium) qui ont différents effets d'interférence sur la lumière de différentes longueurs d'onde. Il peut permettre à la fluorescence de passer en douceur, tandis que la lumière d'excitation par réflexion peut exciter l'échantillon.
(3) Spécimen
Les tranches de tissus ou autres échantillons ne doivent pas être trop épais. S'ils sont trop épais, la majeure partie de la lumière d'excitation est consommée dans la partie inférieure de l'échantillon, tandis que la partie supérieure directement observée par l'objectif n'est pas complètement excitée. De plus, le chevauchement des cellules ou le masquage des impuretés peuvent affecter le jugement.
(4) Agent d'étanchéité
La glycérine est couramment utilisée comme agent de montage, qui ne doit présenter aucune fluorescence spontanée, incolore et transparente. La luminosité de la fluorescence est relativement brillante à pH 8.5-9.5 et ne s'estompe pas facilement rapidement. Par conséquent, un mélange égal de glycérol et de tampon carbonate 0,5mol/lpH9.0-9,5 est couramment utilisé comme agent de montage.
(5) Huile miroir
Lors de l’utilisation d’un microscope à fluorescence en champ sombre et d’un microscope à huile pour observer des échantillons, il est nécessaire d’utiliser de l’huile pour lentilles. Il est préférable d’utiliser une huile pour lentilles non fluorescente spécialement conçue, qui peut également être remplacée par du glycérol comme mentionné ci-dessus. La paraffine liquide peut également être utilisée, mais l'indice de réfraction est faible et a un léger impact sur la qualité de l'image.
