Compétences et méthodes d'utilisation du microscope à fluorescence
Paramètres techniques du microscope à fluorescence 1. Oculaire grand angle 2. Objectif achromatique 3. Convertisseur d'objectif à quatre trous 4. Dispositif émetteur de fluorescence bleu (b) vert (g) système d'excitation 1 0 lampe à mercure 0 W 5. Coaxial grossier mécanisme de micro-mise au point : plage de mise au point 15 mm, valeur de micro-grille 0,002 mm 6. Plage de déplacement longitudinal de l'établi mécanique double couche : 70 mm, plage de déplacement latéral : 50 mm.
Compétences et méthodes d'utilisation du microscope à fluorescence
(1) lames de verre
L'épaisseur de la diapositive doit être comprise entre 0.8-1,2 mm et 1,2 mm. Une lame trop épaisse n’absorbera pas beaucoup de lumière d’une part et ne fera pas rassembler la lumière d’excitation sur l’échantillon d’autre part. La lame doit être lisse, d’épaisseur uniforme et exempte de fluorescence spontanée évidente. Des lames de verre Shi Ying sont parfois nécessaires.
(2) Verre de protection
Le verre de protection a une épaisseur d'environ 0,17 mm et est lisse. Afin d'améliorer la lumière d'excitation, un verre de protection interférentiel peut également être utilisé, qui est une sorte de verre de protection spécial avec plusieurs couches de substances (telles que le fluorure de magnésium) qui ont différents effets d'interférence sur différentes longueurs d'onde de lumière. Il peut faire passer la fluorescence en douceur et refléter la lumière d'excitation, et cette lumière d'excitation réfléchie peut exciter l'échantillon.
(3) Spécimens
Les coupes de tissus ou autres échantillons ne doivent pas être trop épais. S'il est trop épais, la majeure partie de la lumière d'excitation est consommée dans la partie inférieure de l'échantillon, tandis que la partie supérieure directement observée par l'objectif n'est pas complètement excitée. De plus, le chevauchement des cellules ou le masquage des impuretés affectent le jugement.
(4) agent d'étanchéité
Le glycérol est couramment utilisé comme agent d'étanchéité, qui doit être incolore et transparent sans fluorescence spontanée. La luminosité de la fluorescence est brillante à pH 8,5 ~ 9,5 et il n'est pas facile de s'estomper rapidement. Par conséquent, le mélange équivalent de glycérol et de tampon carbonate 0,5 mol/l PH9.0 ~ 9,5 est souvent utilisé comme agent d'étanchéité.
(5) huile de miroir
Généralement, l’huile miroir doit être utilisée lors de l’observation d’échantillons avec un microscope à fluorescence à fond noir et un miroir à huile. Il est préférable d'utiliser une huile miroir spéciale non fluorescente, ou la glycérine ci-dessus peut être utilisée à la place. La paraffine liquide peut également être utilisée, mais l'indice de réfraction est faible, ce qui a un léger impact sur la qualité de l'image.
