Structure et composants principaux d'un microscope à fluorescence
La microscopie à fluorescence est un outil essentiel en cytochimie immunofluorescente. Il est composé de composants principaux tels que la source lumineuse, le système de plaque filtrante et le système optique. Il consiste à utiliser une certaine longueur d'onde de lumière pour exciter l'échantillon à émettre de la fluorescence, et à observer l'image de fluorescence de l'échantillon en amplifiant le système d'objectif et d'oculaire.
Structure et composants principaux d'un microscope à fluorescence
(1) Source lumineuse
De nos jours, les lampes au mercure à ultra haute pression de 200 W sont souvent utilisées comme sources lumineuses. Ils sont faits de verre de quartz, avec une forme sphérique au milieu, et une certaine quantité de mercure est remplie à l'intérieur. Pendant le travail, la décharge entre les deux électrodes provoque l'évaporation du mercure et la pression de l'air dans la balle augmente rapidement. Lorsque le mercure est complètement évaporé, il peut atteindre 50-70 pression atmosphérique standard, et ce processus prend généralement environ 5-15 minutes. La luminescence de la lampe à mercure à ultra-haute pression est le résultat de l'émission de quanta de lumière lors de la dissociation et de la réduction continues des molécules de mercure par la décharge entre les électrodes. Il émet une forte lumière ultraviolette et bleu-violet, suffisante pour exciter diverses substances fluorescentes. Il est donc largement utilisé en microscopie à fluorescence.
Les lampes au mercure à ultra-haute pression émettent également beaucoup de chaleur. Par conséquent, la maison de la lampe doit avoir de bonnes conditions de dissipation thermique et la température de l'environnement de travail ne doit pas être trop élevée.
La nouvelle lampe au mercure à ultra-haute pression peut être allumée sans haute tension au début de l'utilisation. Après une période d'utilisation, il doit être démarré à haute tension (environ 15000V). Après le démarrage, la tension de fonctionnement de maintenance est généralement de 50-60 V et le courant de fonctionnement est d'environ 4 A. La durée de vie moyenne d'une lampe au mercure à ultra haute pression de 200 W est d'environ 200 heures si elle est utilisée pendant 2 heures à chaque fois. Plus le temps de travail est court, plus la durée de vie est courte. S'il n'est utilisé que pendant 20 minutes, sa durée de vie sera réduite de 50 %. Par conséquent, minimisez le nombre de démarrages lors de son utilisation. Lors de l'utilisation de l'ampoule, son efficacité lumineuse se réduit progressivement. Une fois le voyant éteint, attendez qu'il refroidisse avant de redémarrer. Ne pas éteindre l'ampoule immédiatement après l'avoir allumée, afin de ne pas endommager l'électrode en raison d'une évaporation incomplète du mercure. Généralement, il faut attendre 15 minutes. En raison de la haute pression de la lampe au mercure à ultra haute pression et des rayons ultraviolets puissants, l'ampoule doit être placée dans la chambre de la lampe avant de pouvoir être allumée, afin de ne pas endommager les yeux et provoquer un fonctionnement en cas d'explosion .
Le circuit de la source lumineuse de la lampe à mercure à ultra haute pression (100W ou 200W) et plusieurs pièces dont le transformateur, le ballast et le démarrage. Il existe un système de réglage du centre lumineux de l'ampoule dans la chambre de la lampe. Un réflecteur concave plaqué aluminium est installé derrière l'ampoule et une lentille collectrice de lumière est installée à l'avant.
La lampe domestique au mercure à ultra haute pression GCQ-200 a de bonnes performances et peut remplacer les ampoules importées telles que HBO-200. La durée de vie moyenne est de plus de 200h et le prix est relativement bas.
Un dispositif de source de lumière fluorescente au tungstène au brome à haute température de couleur simple et portable développé dans mon pays a une petite taille, un poids léger, une faible puissance, une double utilisation CA et CC (avec alimentation CC), facile à transporter, facile à utiliser et a été vulgarisé et appliqué.
(2) Système de filtre de couleur
Le système de filtre de couleur est une partie importante du microscope à fluorescence, qui se compose d'une plaque de filtre d'excitation et d'une plaque de filtre de pressage. Le modèle de plaque filtrante et le nom de chaque fabricant ne sont souvent pas uniformes. Les plaques filtrantes portent généralement le nom de la couleur de base, les lettres devant représentent la couleur, les lettres à l'arrière représentent le verre et les chiffres représentent les caractéristiques du modèle. microscope Olympe
(3) Lentille d'objectif
Diverses lentilles d'objectif peuvent être utilisées, mais des lentilles d'objectif achromatiques sont utilisées car leur autofluorescence est minimale et leurs propriétés de transmission de la lumière (gamme de longueurs d'onde) conviennent à la fluorescence. Étant donné que la luminosité de fluorescence de l'image dans le champ de vision du microscope est proportionnelle au carré du rapport d'ouverture de la lentille d'objectif et inversement proportionnelle à son grossissement, afin d'améliorer la luminosité de l'image de fluorescence, une lentille d'objectif avec un grand le rapport d'ouverture doit être utilisé. Surtout à fort grossissement, son effet est très évident. Par conséquent, pour les échantillons dont la fluorescence est insuffisante, une lentille d'objectif avec un grand rapport d'ouverture doit être utilisée avec un oculaire aussi bas que possible (4×, 5×, 6,3×, etc.).
(4) Miroir
La couche réfléchissante du réflecteur est généralement plaquée d'aluminium, car l'aluminium absorbe moins dans la région bleu-violet de la lumière ultraviolette et de la lumière visible, et la réflexion est supérieure à 90 %, tandis que la réflexion de l'argent n'est que de 70 %. Généralement, un réflecteur plat est utilisé.
(5) Condenseur
Les condenseurs conçus pour la microscopie à fluorescence sont en verre de quartz ou autre verre transparent aux UV. Il existe deux types de condenseurs à champ clair et de condenseurs à champ sombre. Il existe également des concentrateurs de fluorescence à contraste de phase.
(6) Dispositif Epi-light
Le nouveau type de dispositif épi-lumière est qu'après que la lumière de la source lumineuse ait atteint le filtre spectroscopique interférentiel, la partie à courte longueur d'onde (ultraviolet et bleu violet) est réfléchie en raison des propriétés du revêtement sur le filtre. Lorsque le filtre fait face à la source lumineuse, l'angle est de 45. Lorsqu'il est incliné, il tire verticalement vers l'objectif et tire vers l'échantillon à travers l'objectif, de sorte que l'échantillon est excité. A ce moment, l'objectif agit directement comme un collecteur de lumière. Dans le même temps, la partie longue du filtre (vert, jaune, rouge, etc.) est transparente pour le filtre, de sorte qu'elle ne réfléchit pas dans la direction de l'objectif, et le filtre agit comme une plaque de filtre d'excitation, parce que la fluorescence de l'échantillon se situe dans la région des grandes longueurs d'onde de la lumière visible, peut traverser le filtre et atteindre l'oculaire pour l'observation, la luminosité de l'image fluorescente augmente avec l'augmentation du grossissement et est plus forte que la lumière transmise source à fort grossissement. En plus de la fonction d'une source de lumière de transmission, il convient mieux à l'observation directe d'échantillons opaques et translucides, tels que des tranches épaisses, des membranes filtrantes, des colonies et des échantillons de culture tissulaire. Les nouveaux microscopes à fluorescence développés ces dernières années utilisent principalement des dispositifs à épi-lumière, appelés microscopes à épi-fluorescence.
