La différence entre le microscope confocal laser et le microscope optique traditionnel
La microscopie confocale à fluorescence à balayage laser est un instrument d'analyse de biologie moléculaire et cellulaire relativement avancé qui utilise une technologie informatique, laser et de traitement d'image pour obtenir des données tridimensionnelles d'échantillons biologiques. Il est principalement utilisé pour observer la structure des cellules vivantes et les changements biologiques de molécules et d'ions spécifiques, l'analyse quantitative et la détermination quantitative en temps réel.
Le principe de la microscopie confocale laser : utilisez le trou d'épingle d'éclairage placé derrière la source lumineuse et le trou d'épingle de détection placé devant le détecteur pour réaliser un éclairage ponctuel et une détection ponctuelle. La lumière émise par la source lumineuse à travers le trou d'épingle d'éclairage est focalisée sur un point du plan focal de l'échantillon, et la fluorescence émise à partir de ce point est imagée sur le trou d'épingle de détection, et toute lumière émise en dehors de ce point est bloquée par la détection trou d'épingle. Le sténopé d'éclairage et le sténopé de détection sont conjugués au point irradié ou au point détecté, de sorte que le point détecté est le point confocal, et le plan où se trouve le point détecté est le plan confocal.
L'ordinateur affiche les points détectés sur l'écran de l'ordinateur sous la forme de points d'image. Afin de générer une image complète, le système de balayage dans le chemin optique balaye sur le plan focal de l'échantillon pour générer une image confocale complète. Tant que la scène se déplace de haut en bas le long de l'axe Z, une nouvelle couche de l'échantillon est déplacée vers le plan confocal, et la nouvelle couche de l'échantillon est imagée sur le moniteur. Avec le mouvement continu de l'axe Z, des images continues de différentes couches de l'échantillon peuvent être obtenues. Image coupée à la lumière.
La différence entre les microscopes optiques traditionnels
Les microscopes à fluorescence traditionnels présentent un défaut insurmontable : les structures fluorescentes en dehors du plan focal sont floues et floues. La raison en est que la plupart des spécimens biologiques ont des structures qui se chevauchent. Si les structures marquées par fluorescence sont distribuées à différents niveaux et se chevauchent, la fluorescence diffusée au-dessus ou au-dessous du plan focal est également reçue par l'objectif et la résolution du microscope à fluorescence sera grandement améliorée. réduire.
Sur la base des microscopes optiques traditionnels, les microscopes confocaux à balayage laser utilisent la lumière laser comme source de lumière, adoptent le principe et le dispositif de focalisation conjuguée et utilisent des ordinateurs pour effectuer le traitement d'image numérique, l'observation, l'analyse et la sortie des objets observés. L'échantillon peut être scanné par tomographie et imagé pour une observation et une analyse non destructives de la structure spatiale tridimensionnelle des cellules. En même temps, en utilisant des sondes de marquage immunofluorescent et de marquage fluorescent ionique, cette technologie peut non seulement observer des cellules fixes et des coupes de tissus, mais également effectuer une observation et une détection dynamiques en temps réel de la structure, des molécules, des ions et des activités vitales des cellules vivantes, au niveau subcellulaire L'observation de signaux physiologiques tels que Ca2 plus, la valeur du pH, le potentiel membranaire et les modifications de la morphologie cellulaire est devenue une nouvelle génération d'outils de recherche puissants dans les domaines de la morphologie, de la biologie cellulaire moléculaire, des neurosciences, de la pharmacologie et de la génétique.
