Les principes fondamentaux et les éléments structurels d'un microscope à fluorescence
La microscopie à fluorescence utilise un point avec une efficacité lumineuse élevée pour émettre de la lumière d'une certaine longueur d'onde (telle que la lumière ultraviolette 3650 pouces ou la lumière bleue violette 4200 pouces) à travers le système de filtre comme lumière d'excitation pour exciter les substances fluorescentes dans l'échantillon pour émettre la fluorescence de différentes couleurs Après cela, observez à travers le grossissement de l'objectif et de l'oculaire. De cette façon, sous un fond à fort contraste, même si la fluorescence est très faible, il est facile à identifier et présente une grande sensibilité. Il est principalement utilisé pour la recherche de la structure et de la fonction cellulaire et de la composition chimique. La structure de base d'un microscope à fluorescence est composée d'un microscope optique ordinaire plus quelques accessoires (tels qu'une source de lumière fluorescente, un filtre d'excitation, un séparateur de faisceau bicolore et un filtre de blocage, etc.). Source de lumière fluorescente : utilise généralement une lampe au mercure à ultra haute pression (50-200W), qui peut émettre de la lumière de différentes longueurs d'onde, mais chaque substance fluorescente a une longueur d'onde d'excitation qui produit la fluorescence la plus forte, donc un filtre d'excitation (généralement, il existe des filtres d'excitation ultraviolets, violets, bleus et verts), qui ne laissent passer que la lumière d'excitation d'une certaine longueur d'onde et irradient l'échantillon, tout en absorbant une autre lumière. Après que chaque substance a été irradiée par une lumière d'excitation, elle émet une fluorescence visible avec une longueur d'onde plus longue que la longueur d'onde d'irradiation en un temps très court. La fluorescence est spécifique et généralement plus faible que la lumière d'excitation. Afin d'observer une fluorescence spécifique, un blocage (ou une suppression) doit être ajouté derrière la lentille d'objectif et utilisé conjointement avec celle-ci.
La différence entre le microscope à fluorescence et le microscope ordinaire
1. La méthode d'éclairage est généralement épiscopique, c'est-à-dire que la source lumineuse est projetée sur l'échantillon à travers l'objectif ;
2. La source lumineuse est la lumière ultraviolette, la longueur d'onde est plus courte et la résolution est supérieure à celle des microscopes ordinaires.
3. Il y a deux filtres spéciaux, celui devant la source lumineuse est utilisé pour filtrer la lumière visible, et celui entre l'oculaire et l'objectif est utilisé pour filtrer les rayons ultraviolets afin de protéger l'œil humain.
Le microscope à fluorescence est également une sorte de microscope optique, la principale différence est que la longueur d'onde d'excitation des deux est différente. Cela détermine la différence entre le microscope à fluorescence et le microscope optique ordinaire en termes de structure et d'utilisation.
La microscopie à fluorescence est un outil essentiel en cytochimie immunofluorescente. Il est composé de composants principaux tels que la source lumineuse, le système de plaque filtrante et le système optique. Il consiste à utiliser une certaine longueur d'onde de lumière pour exciter l'échantillon à émettre de la fluorescence, et à observer l'image de fluorescence de l'échantillon en amplifiant le système d'objectif et d'oculaire.
