Le principe et les caractéristiques structurelles de la microscopie à fluorescence
La microscopie à fluorescence utilise un point à haute efficacité lumineuse pour émettre une certaine longueur d'onde de lumière (telle que la lumière ultraviolette 3650 pouces ou la lumière bleue violette 4200 pouces) à travers un système de filtrage de couleur comme lumière d'excitation, et excite les substances fluorescentes dans l'échantillon pour émettre divers couleurs de fluorescence. Après cela, il est observé par grossissement de l'objectif et de l'oculaire. De cette façon, il est facile à reconnaître même lorsque la fluorescence est très faible sur un fond fort, avec une sensibilité élevée. Il est principalement utilisé pour l'étude de la structure et de la fonction cellulaire, ainsi que de la composition chimique. La structure de base d'un microscope à fluorescence est composée d'un microscope optique ordinaire et d'accessoires tels qu'une source de lumière fluorescente, un filtre d'excitation, un séparateur de faisceau dichroïque et un filtre de blocage. Les sources lumineuses fluorescentes utilisent généralement des lampes à mercure à ultra haute pression (50-200W), qui peuvent émettre de la lumière de différentes longueurs d'onde. Cependant, chaque substance fluorescente a une longueur d'onde de lumière d'excitation qui produit la fluorescence la plus forte, de sorte que des filtres d'excitation (généralement des filtres d'excitation ultraviolets, violets, bleus et verts) doivent être ajoutés pour permettre à seulement une certaine longueur d'onde de lumière d'excitation de pénétrer et d'irradier le spécimen, tout en absorbant toute autre lumière. Après avoir été irradiée par une lumière d'excitation, chaque substance émet une fluorescence visible plus longue que la longueur d'onde d'irradiation en un temps très court. La fluorescence a une spécificité et est généralement plus faible que la lumière d'excitation. Afin d'observer une fluorescence spécifique, il est nécessaire d'ajouter un blocage (ou une suppression) derrière l'objectif et de l'utiliser en combinaison.
Différence entre le microscope à fluorescence et le microscope ordinaire
1. La méthode d'éclairage est généralement de type faisceau descendant, dans laquelle la source lumineuse est projetée sur l'échantillon à travers une lentille d'objectif ;
2. La source de lumière est une lumière ultraviolette, avec une longueur d'onde plus courte et une résolution plus élevée que les microscopes ordinaires ;
3. Il y a deux filtres spéciaux, celui devant la source lumineuse est utilisé pour filtrer la lumière visible, et celui entre l'oculaire et l'objectif est utilisé pour filtrer les rayons ultraviolets afin de protéger l'œil humain.
La microscopie à fluorescence est également un type de microscopie optique, la principale différence étant les différentes longueurs d'onde d'excitation. Cela détermine les différences de structure et d'utilisation entre la microscopie à fluorescence et la microscopie optique ordinaire.
La microscopie à fluorescence est un outil de base pour la cytochimie par immunofluorescence. Il est composé de composants principaux tels qu'une source lumineuse, un système de plaque filtrante et un système optique. Il utilise une certaine longueur d'onde de lumière pour exciter l'échantillon afin d'émettre une fluorescence et l'amplifie à travers un objectif et un système d'oculaire pour observer l'image de fluorescence de l'échantillon.
