Microscope à biofluorescence verticale
Le principe de la microscopie à fluorescence consiste à utiliser une source de lumière ponctuelle très efficace (comme une lampe à mercure à ultra-haute pression) pour émettre une certaine longueur d'onde de lumière (comme la lumière ultraviolette 3650 λ ou la lumière bleue violette 4200 λ) à travers un système de filtre couleur comme lumière d'excitation, qui excite les substances fluorescentes dans le spécimen pour émettre différentes couleurs de fluorescence. Ensuite, il est filtré par un filtre de blocage (ou de suppression) derrière la lentille objective et observé par l'effet d'agrandissement de l'oculaire.
Le filtre de blocage a deux fonctions: premièrement, il absorbe et bloque la lumière d'excitation de l'entrée dans l'oculaire pour éviter d'interférer avec la fluorescence et d'endommager les yeux; La seconde consiste à sélectionner et à permettre à la fluorescence spécifique de passer, présentant une couleur fluorescente spécifique.
Les microscopes à fluorescence peuvent être divisés en deux types en fonction du principe du chemin léger:
1. Microscope à fluorescence à transmission
Les microscopes à fluorescence plus anciens utilisent un projecteur pour exciter la fluorescence en passant la source de lumière d'excitation à travers le matériau de l'échantillon. Son avantage est une forte fluorescence à un faible grossissement, mais son désavantage est que sa fluorescence diminue avec l'augmentation du grossissement. Il convient donc uniquement à l'observation des matériaux d'échantillons plus grands.
2. Microscope à fluorescence de lumière tombant
La lumière d'excitation tombe de la lentille objective sur la surface de l'échantillon, en utilisant la même lentille objective que le condenseur d'éclairage et la lentille objective pour collecter la fluorescence.
Un séparateur de faisceau à double couleur (miroir dichroïque) doit être ajouté au chemin optique, qui forme un angle de 45 degrés avec l'axe optique. La lumière d'excitation est réfléchie dans la lentille objective et concentrée sur l'échantillon. La fluorescence générée par l'échantillon, ainsi que la lumière d'excitation réfléchie à partir de la surface de la lentille objective et de la vitre de couverture, entrez la lentille objective en même temps et retournez au séparateur de faisceau de couleur double pour séparer la lumière d'excitation et la fluorescence. La lumière d'excitation résiduelle est ensuite bloquée par l'absorption du filtre. Si différentes combinaisons de filtres d'excitation, de séparateurs de faisceau à double couleur et de filtres de blocage sont utilisés, ils peuvent répondre aux besoins de différents produits de réaction fluorescents.
Les avantages de ce microscope à fluorescence sont un éclairage uniforme de champ, une imagerie claire et une fluorescence plus forte avec un grossissement plus grand.
