Quels sont les avantages de la microscopie laser confocale
Par rapport aux microscopes traditionnels à champ large, la microscopie confocale à balayage laser présente les caractéristiques de haute définition, de haute résolution et de haute sensibilité. Il est largement utilisé dans le domaine de la biomédecine et est devenu un outil d'imagerie important dans ce domaine. Pourquoi confocal peut-il obtenir autant d'amour, et quels avantages a-t-il ? Cet article énumère trois aspects pour discuter des avantages du confocal.
Ne collectez le signal que sur le plan focal, ce qui rend l'image claire du flou
Alors, comment la microscopie confocale atteint-elle cet avantage ? Cela est dû au matériel confocal clé - le trou d'épingle, comme illustré à la figure 2. Il s'agit d'un petit trou devant le détecteur et placé sur le plan optique conjugué au plan focal de l'échantillon. Lorsque la lumière d'excitation irradie l'échantillon, le plan focal et le plan non focal de la zone d'échantillon seront excités pour générer des signaux de fluorescence, ajustez la taille de trou d'épingle appropriée (généralement 1 Au), de sorte que le signal de fluorescence sur le plan focal (ligne pointillée verte) peut être Les signaux fluorescents (lignes pointillées rouges et bleues) qui traversent le sténopé pour atteindre le détecteur hors du plan focal ne peuvent pas atteindre le détecteur à travers le sténopé. Grâce à l'ajout de trous d'épingle matériels, le confocal peut obtenir des images claires et de haute qualité sans changer la méthode de fabrication des microscopes à fluorescence ordinaires.
En raison de l'existence du sténopé, nous ne pouvons acquérir le signal que sur le plan focal et obtenir une image bidimensionnelle à haute résolution. En ajustant en continu la position de l'axe Z, des images bidimensionnelles à différentes positions de l'axe Z peuvent être obtenues, et une série d'images de "tranche optique" continue peut être obtenue. Après avoir obtenu ces tranches optiques, le module 3D équipé du logiciel de l'instrument peut être utilisé pour reconstruire l'image 3D afin de construire une image 3D claire. Cette collection continue et non destructive d'images de tranches optiques réalise la fonction de "CT cellulaire".
La précision des résultats de colocalisation est étroitement liée à la résolution de l'image, nous devons donc choisir une méthode d'imagerie à plus haute résolution lors de la réalisation d'expériences de colocalisation. Comparée aux microscopes traditionnels, la microscopie confocale est devenue un outil puissant pour la recherche en colocalisation en raison de ses avantages à haute résolution.
En raison de l'existence de la limite de diffraction, la résolution optique confocale conventionnelle est d'environ 200 nm. Lorsque nous devons observer des structures supérieures à 200 nm, le confocal peut déterminer avec précision le degré de colocalisation. Si une analyse de colocalisation est requise, le module d'analyse de colocalisation équipé dans le logiciel confocal peut être sélectionné.
