Quelles sont les différences entre la microscopie à fluorescence et la microscopie inversée
Le microscope est un instrument important dans la culture cellulaire et les expériences dérivées associées. Il existe actuellement différents types de microscopes sur le marché et choisir un microscope qui répond aux besoins et qui soit adapté constitue un défi. Ci-dessous, nous présenterons les principes des microscopes inversés et des microscopes à fluorescence parmi lesquels chacun pourra choisir.
Le microscope inversé, comme un microscope ordinaire, se compose principalement de trois parties : la partie mécanique, la partie éclairage et la partie optique.
La composition d'un microscope inversé est la même que celle d'un microscope droit ordinaire, sauf que l'objectif et le système d'éclairage sont inversés, le premier sous la platine et le second au-dessus de la platine.
Cette structure augmente considérablement la distance effective entre le système de projecteurs d'éclairage et la scène, facilitant le placement d'outils d'observation plus épais tels que des boîtes de culture et des bouteilles de culture cellulaire (bien sûr, des lames de verre peuvent également être utilisées), tandis que la distance de travail entre les lentille d'objectif et le matériau n'a pas besoin d'être très grand.
Le microscope inversé est utilisé par les institutions médicales et sanitaires, les universités et les instituts de recherche pour observer les micro-organismes, les cellules, les bactéries, les cultures tissulaires, les suspensions, les sédiments, etc. Il peut observer en permanence le processus de prolifération et de division cellulaire et bactérienne dans le milieu de culture, et peut capturer n’importe quelle forme de ce processus.
Largement utilisé dans des domaines tels que la cytologie, la parasitologie, l'oncologie, l'immunologie, le génie génétique, la microbiologie industrielle et la botanique.
La microscopie à fluorescence est utilisée pour étudier l'absorption, le transport, la distribution et la localisation de substances dans les cellules.
Pour l'objet testé, il existe deux manières de générer de la fluorescence : la fluorescence spontanée, qui est directement émise par l'irradiation ultraviolette ; La fluorescence secondaire se produit lorsque l'objet observé est traité avec des colorants fluorescents et exposé à la lumière ultraviolette avant d'émettre une fluorescence.
Certaines substances présentes dans les cellules, comme la chlorophylle, produisent une fluorescence spontanée après avoir été exposées au rayonnement ultraviolet ; Certaines substances elles-mêmes peuvent ne pas émettre de fluorescence, mais si elles sont colorées avec des colorants fluorescents ou des anticorps fluorescents, elles peuvent également émettre une fluorescence secondaire sous rayonnement ultraviolet.
Un microscope à fluorescence utilise une source de lumière ponctuelle à haute efficacité lumineuse pour émettre une certaine longueur d'onde de lumière (UV 365 nm ou UV bleu 420 nm) à travers un système de filtrage des couleurs comme lumière d'excitation, qui excite les substances fluorescentes de l'échantillon pour émettre diverses couleurs de fluorescence. Après cela, il est observé grâce au grossissement de l’objectif et de l’oculaire.
De cette façon, même avec une faible fluorescence, il est facilement reconnaissable et très sensible sur des fonds fortement contrastés. Il est principalement utilisé pour étudier la structure, la fonction et la composition chimique des cellules.
