Principe de fonctionnement du microscope confocal laser
La microscopie confocale laser est basée sur l'imagerie au microscope à fluorescence avec l'ajout d'un dispositif de balayage laser, l'utilisation d'un traitement d'image informatique, la résolution de l'imagerie optique augmentée de 30 % - 40 %, l'utilisation de l'excitation par la lumière ultraviolette ou visible de la lumière fluorescente. sondes, de manière à obtenir l'image de fluorescence de la microstructure interne des cellules ou des tissus, au niveau subcellulaire pour observer les signaux physiologiques et les changements de morphologie cellulaire, tels que Ca2+, PH, potentiel membranaire, etc., est devenu une nouvelle génération d'outils de recherche puissants en morphologie, biologie moléculaire, neurosciences, pharmacologie, génétique et autres domaines. Le système d’imagerie confocale laser constitue une nouvelle génération puissante d’outils de recherche dans les domaines de la morphologie, de la biologie moléculaire, des neurosciences, de la pharmacologie, de la génétique, etc. Le système d'imagerie confocale laser peut être utilisé pour observer une variété de tissus et de cellules colorés, non colorés et marqués par fluorescence, etc., pour observer et étudier la croissance et le développement de sections de tissus et de cellules in vivo, et pour étudier et mesurer des cellules intracellulaires. transport de substances et conversion d’énergie. Il est capable de réaliser l'étude des changements d'ions et de PH dans les cellules vivantes (RATIO), la recherche sur les neurotransmetteurs, l'interférence différentielle et la tomographie de fluorescence, la tomographie et le chevauchement de fluorescence multiple, l'analyse par spectroscopie de fluorescence des indicateurs de fluorescence, l'analyse quantitative d'échantillons de fluorescence du temps. balayage retardé et composants dynamiques de la structure dynamique tridimensionnelle des tissus et des cellules, analyse du transfert d'énergie de résonance de fluorescence, recherche sur l'hybridation in situ par fluorescence (FISH), recherche sur le cytosquelette (FISH) et étude du cytosquelette. FISH), recherche sur le cytosquelette, recherche sur la localisation des gènes, analyse de produits PCR in situ en temps réel, recherche sur la récupération du blanchiment par fluorescence (FRAP), recherche sur la communication intercellulaire, recherche inter-protéine, recherche sur le potentiel membranaire et la fluidité membranaire, etc., pour compléter le analyse de l'analyse d'images et reconstruction tridimensionnelle et autres analyses.
Domaines d'application du système de microscope confocal laser :
Impliquant la médecine, la recherche scientifique animale et végétale, la biochimie, la **ologie, la biologie cellulaire, l'embryon tissulaire, la science alimentaire, la génétique, la pharmacologie, la physiologie, l'optique, la pathologie, la botanique, les neurosciences, la biologie marine, la science des matériaux, la science électronique, la mécanique, le pétrole géologie, minéralogie.
Principes de base
Le microscope optique traditionnel utilise une source de lumière de champ, l'image de chaque point de l'échantillon sera perturbée par la diffraction ou la diffusion de la lumière des points voisins ; le microscope confocal laser utilise un faisceau laser à travers le trou d'épingle éclairant pour former une source de lumière ponctuelle pour scanner chaque point sur le plan focal de l'échantillon, le point irradié sur l'échantillon sera imagé au niveau du trou d'épingle de détection, puis reçu par le sténopé de détection après le tube multiplicateur de points (PMT) ou le dispositif d'électrocouplage à froid (cCCD), point par point ou ligne par ligne, puis être rapidement affiché sur l'écran de l'ordinateur. Reçue point par point ou ligne par ligne par le PMT ou le cCCD derrière le sténopé de la sonde, l'image fluorescente se forme rapidement sur l'écran de l'ordinateur. Le sténopé d'éclairage et le sténopé de détection sont conjugués par rapport au plan focal de l'objectif, les points sur le plan focal sont focalisés sur le sténopé d'éclairage et le sténopé d'émission en même temps, et les points en dehors du plan focal ne le seront pas. être imagée au niveau du trou d'épingle de détection, de sorte que l'image confocale obtenue soit une coupe transversale optique de l'échantillon, ce qui surmonte l'inconvénient du flou de l'image du microscope ordinaire.
