Différences et caractéristiques du microscope à fluorescence et du microscope optique ordinaire
Le microscope à fluorescence et le microscope optique ordinaire sont différents, ce n'est pas par l'éclairage de la source de lumière ordinaire pour observer l'échantillon, mais par l'utilisation d'une certaine longueur d'onde de lumière (généralement ultraviolette, lumière bleu-violet) pour exciter le matériau fluorescent dans l'échantillon. sous le microscope, de sorte que la fluorescence de la source de lumière du microscope à fluorescence ne joue pas un éclairage direct, mais comme une sorte d'excitation du matériau fluorescent dans l'échantillon de la source d'énergie. La raison pour laquelle nous pouvons observer l'échantillon n'est pas due à l'éclairage de la source lumineuse, mais au phénomène de fluorescence présenté par le matériau fluorescent dans l'échantillon après avoir absorbé l'énergie lumineuse d'excitation. On peut voir que les caractéristiques du microscope à fluorescence, principalement sa source de lumière, peuvent fournir un grand nombre de plages de longueurs d'onde spécifiques de la lumière d'excitation, de sorte que le matériau fluorescent à l'intérieur de l'échantillon examiné puisse obtenir l'intensité nécessaire de la lumière d'excitation. Dans le même temps, le microscope à fluorescence doit disposer d'un système de filtre correspondant. Le microscope à fluorescence est l'outil de base pour l'histochimie de fluorescence. Il est composé d'une source de lumière ultra-haute pression, d'un système de filtre (y compris une plaque filtrante d'excitation et de suppression), d'un système optique et d'un système photographique et d'autres composants majeurs, consiste à utiliser une certaine longueur d'onde de lumière pour stimuler l'émission de fluorescence de l'échantillon.
1. la méthode d'excitation par fluorescence : selon la plage de longueurs d'onde de la lumière, elle est divisée en méthode d'excitation UV (en utilisant un éclairage ultraviolet) et en méthode d'excitation BV (en utilisant la lumière bleue violette), deux types de méthode d'excitation UV sont plus courts que 400 nm près de la lumière ultraviolette pour excitation. Il n'y a pas de lumière d'excitation visible dans cette méthode, donc la fluorescence observée montre la fluorescence inhérente du colorant, et il est facile de distinguer la fluorescence spécifique sur l'échantillon de l'auto-fluorescence du tissu de fond.
2. Méthode d'excitation BV : La méthode est centrée sur 404 nm, 434 nm de l'ultraviolet à la lumière bleue pour l'excitation. Cette méthode utilise la lumière bleue pour irradier l'échantillon, de sorte que le filtre de coupure du système d'observation de fluorescence doit utiliser un filtre capable de bloquer complètement la lumière bleue et de laisser passer de manière adéquate la fluorescence verte et jaune souhaitée. Pigments fluorescents pour la méthode des anticorps fluorescents. Étant donné que la longueur d'onde d'absorption maximale de la lumière d'excitation et la longueur d'onde d'émission maximale de la fluorescence sont proches l'une de l'autre, les filtres utilisés dans la méthode d'excitation BV doivent être des filtres à coupure nette. Cette méthode utilise la lumière bleue comme lumière d’excitation, de sorte que l’efficacité d’absorption du fluorochrome est plus élevée et qu’une image plus lumineuse peut être obtenue. L'inconvénient est que la fluorescence en dessous de 500 nm n'est pas visible et qu'au-dessus de 500 nm, toute l'image apparaît en jaune. Dans la méthode des anticorps fluorescents, la majeure partie de la spécificité est jugée par la couleur unique du fluorochrome, de sorte que les inconvénients de la méthode d’excitation BV décrite ci-dessus ont tendance à être extrêmement influents lorsqu’on discute d’une spécificité subtile.
