Avantages et inconvénients de la microscopie à balayage laser multiphotonique (MLSM)
La microscopie à balayage laser multiphotonique est une méthode expérimentale basée sur la technologie de microscopie à balayage laser, qui offre de meilleures capacités de coupe optique pour l'observation tridimensionnelle. La méthode d'excitation par fluorescence multiphotonique utilise une lumière rouge à grande longueur d'onde ou une lumière proche infrarouge pour collecter des images de fluorescence haute résolution d'échantillons, ce qui provoque des dommages minimes aux spécimens vivants. Par conséquent, il convient à l’imagerie de cellules vivantes, en particulier de tissus vivants épais tels que des tranches de cerveau, des embryons, etc.. Des études d’imagerie d’organes entiers ou même de corps entiers.
Les avantages sont les suivants :
1. Utilisez la lumière rouge ou la lumière infrarouge pour exciter, et la diffusion de la lumière est faible (la diffusion des petites particules est inversement proportionnelle à la quatrième puissance de la longueur d'onde).
2. Aucun trou d'épingle n'est nécessaire et davantage de photons dispersés à partir de la section transversale d'imagerie peuvent être collectés.
3. Le sténopé ne peut pas distinguer les photons diffusés émis par la zone défocalisée ou la zone de mise au point, et le rapport signal/bruit de l'imagerie multiphotonique dans les couches profondes est bon.
4. La lumière ultraviolette ou visible utilisée pour l'excitation monophotonique est facilement absorbée et atténuée par l'échantillon avant que le faisceau n'atteigne le plan focal, et il est difficile d'exciter les couches profondes.
5. En termes d'observation au microscope biologique, la première considération est de ne pas endommager l'état actif de l'organisme lui-même et de maintenir le flux d'eau, la concentration d'ions, l'oxygène et les nutriments. Dans le cas de l'observation de la lumière, la chaleur et l'énergie photonique doivent rester dans la quantité d'irradiation et l'énergie lumineuse pour que les cellules ne soient pas endommagées.
6. La microscopie multiphotonique présente également de nombreux avantages. Par exemple, en termes de résolution tridimensionnelle, de pénétration en profondeur, d'efficacité de diffusion, de lumière de fond, de rapport signal/bruit, de contrôle, etc., il existe des caractéristiques transcendantes que les microscopes laser précédents n'avaient pas ou ne pouvaient pas égaler.
La microscopie confocale multiphotonique à balayage laser a été étendue à divers domaines de recherche et d'application. Il peut effectuer une observation tridimensionnelle non destructive d'échantillons dans leur état naturel et améliorer la résolution et le rapport signal/bruit du système. Utilisation de matériaux d'excitation multiphotoniques Les changements de propriétés peuvent également réaliser un stockage de données de hauteur tridimensionnelle et un micro-usinage tridimensionnel dans n'importe quelle direction, ce qui a une valeur d'application élevée. On pense qu'avec le développement ultérieur des machines, des matériaux, de la technologie laser, etc. liés à la microscopie confocale multiphotonique, une microscopie confocale photonique à balayage laser bénéficiera d'un plus grand développement et d'une application plus large.
Les inconvénients sont les suivants :
1. Il ne peut imager que la fluorescence.
2. Si l'échantillon contient des chromophores capables d'absorber la lumière d'excitation, tels que des pigments, l'échantillon peut être endommagé par la chaleur.
3. La résolution est légèrement réduite. Bien que cela puisse être amélioré en utilisant des trous confocaux en même temps, il y aura une perte de signal.
4. Limité par les coûteux lasers ultrarapides, le coût des microscopes à balayage multiphotonique est relativement élevé.
