Application et utilisation des principes du microscope à fluorescence
Principes et caractéristiques structurelles des microscopes à fluorescence : Les microscopes à fluorescence utilisent une source de lumière ponctuelle avec une efficacité lumineuse élevée pour émettre une lumière d'une certaine longueur d'onde (telle que la lumière ultraviolette de 3 650 pouces ou la lumière bleu-violet de 4 200 pouces) à travers un système de filtre coloré comme lumière d'excitation pour exciter la fluorescence dans l’échantillon. Une fois que la substance a émis une fluorescence de différentes couleurs, elle est ensuite observée grâce au grossissement de l'objectif et de l'oculaire. De cette façon, sous un fond fortement contrasté, même si la fluorescence est très faible, il est facile à identifier et présente une sensibilité élevée. Il est principalement utilisé pour l’étude de la structure et de la fonction cellulaire ainsi que de la composition chimique. La structure de base d'un microscope à fluorescence est composée d'un microscope optique ordinaire et de quelques accessoires (tels qu'une source de lumière à fluorescence, un filtre d'excitation, un séparateur de faisceau bicolore, un filtre de blocage, etc.). Source de lumière fluorescente - utilise généralement une lampe au mercure à ultra haute pression (50 à 200 W), qui peut émettre de la lumière de différentes longueurs d'onde, mais chaque substance fluorescente a une longueur d'onde d'excitation qui produit la fluorescence la plus forte, donc un filtre d'excitation (il existe généralement filtres d'excitation ultraviolets, violets, bleus et verts), qui permettent uniquement à la lumière d'excitation d'une certaine longueur d'onde de traverser et d'éclairer l'échantillon, tout en absorbant toute autre lumière. Une fois que chaque substance est irradiée par une lumière d’excitation, elle émet une fluorescence visible avec une longueur d’onde plus longue que la longueur d’onde d’irradiation en très peu de temps. La fluorescence est spécifique et généralement plus faible que la lumière d'excitation. Afin d'observer une fluorescence spécifique, un filtre bloquant (ou supprimant) est nécessaire derrière l'objectif. Il a deux fonctions : l'une consiste à absorber et à empêcher la lumière d'excitation de pénétrer dans l'oculaire pour éviter de perturber la fluorescence et d'endommager les yeux ; l'autre consiste à sélectionner et à laisser passer une fluorescence spécifique pour montrer une couleur de fluorescence spécifique. Les deux filtres doivent être sélectionnés et utilisés ensemble.
