Méthodes et étapes de débogage pour la microscopie à contraste de phase
un. Sur la base du réglage du système d'éclairage Kuhler, utilisez la méthode du champ clair pour focaliser clairement l'échantillon ;
b. Tournez le projecteur sur Ph1 et alignez-le avec la ligne d'échelle sur le plateau tournant. Sélectionnez un objectif à contraste de phase 10 x et remplacez-le par l'échantillon transparent à observer ;
c. Retirez l'un des oculaires, remplacez-le par un télescope de centrage et faites la mise au point sur les deux anneaux de contraste dans le champ de vision (l'anneau de contraste noir de l'objectif et l'anneau de contraste de transmission de l'objectif à condensateur) ;
d. Les deux anneaux de différence dans le champ de vision ne coïncident pas nécessairement. Ajustez les deux dispositifs de réglage sur le projecteur (réglage des positions gauche et droite des anneaux de différence avec des tiges de réglage et des boutons de type friction pour régler les positions avant et arrière), de sorte que l'anneau transparent se déplace d'avant en arrière pour coïncider avec l'anneau noir. ;
e. Après le réglage, revenez à l'oculaire d'observation et appuyez sur le filtre vert dans le chemin optique pour observer l'image de différence de phase de l'échantillon ;
f. Lors de l'observation avec des objectifs 20x et 40x, le projecteur doit être réglé sur la position Ph2, et lors de l'utilisation d'un objectif 100x, le projecteur doit être réglé sur la position Ph3.
Champ d'application : convient pour observer des échantillons transparents, non colorés ou non, tels que diverses cellules, tissus vivants, tranches de tissus non colorés ou non, organismes aquatiques, etc.
Le principe de base du microscope à contraste de phase
Lorsque la lumière traverse un échantillon relativement transparent, il n’y a aucun changement significatif dans la longueur d’onde (couleur) et l’amplitude (luminosité) de la lumière. Par conséquent, lors de l’observation d’échantillons non colorés (tels que des cellules vivantes) sous un microscope optique ordinaire, leur morphologie et leur structure interne sont souvent difficiles à distinguer. Cependant, en raison des différences d'indice de réfraction et d'épaisseur des différentes parties de la cellule, il y aura des différences dans le chemin optique de la lumière directe et diffractée lors du passage à travers cet échantillon. À mesure que le chemin optique augmente ou diminue, la phase des ondes lumineuses accélérées ou retardées changera (entraînant une différence de phase). La différence de phase de la lumière ne peut pas être ressentie à l'œil nu, mais le microscope à différence de phase peut utiliser son dispositif spécial - une ouverture circulaire et une plaque de phase, et utiliser le phénomène d'interférence de la lumière pour transformer la différence de phase de la lumière en une différence d'amplitude. (différence claire et sombre) qui peut être détectée par l’œil humain. Cela fait que l'objet initialement transparent présente des différences évidentes entre la lumière et l'obscurité, améliore le contraste et nous permet d'observer clairement les cellules vivantes et certaines structures fines à l'intérieur des cellules qui ne peuvent pas être vues ou clairement vues sous les microscopes optiques ordinaires et les microscopes à champ sombre.
Le principe d'imagerie d'un microscope à contraste de phase : la source optique ne peut traverser qu'un anneau transparent à ouverture circulaire, qui est ensuite focalisée en un faisceau de lumière. Lorsque ce faisceau lumineux traverse l'objet testé, il subit différents degrés de déviation (diffraction) en raison des différents chemins optiques de chaque pièce. En raison du fait que l'image formée par l'anneau transparent coïncide avec la surface conjuguée sur la lame de phase et le plan focal derrière l'objectif. Par conséquent, la lumière directe qui n’a pas dévié traverse la surface conjuguée, tandis que la lumière diffractée qui a dévié traverse la surface compensatrice. En raison des propriétés différentes de la surface conjuguée et de la surface de compensation sur la lame de phase, elles généreront respectivement une certaine différence de phase et une certaine réduction de l'intensité de la lumière traversant ces deux parties. Les deux ensembles de lumière convergeront alors à travers la lentille arrière et voyageront sur le même chemin optique, provoquant des interférences entre la lumière directe et la lumière diffractée, transformant la différence de phase en différence d'amplitude. De cette manière, lors de la microscopie à contraste de phase, la différence de phase qui ne peut pas être distinguée par l'œil humain est convertie en une différence d'amplitude (différence de luminosité) qui peut être distinguée par l'œil humain à travers la lumière d'un corps transparent incolore.
