Différence entre le microscope à fluorescence et le microscope optique ordinaire
La différence entre le microscope à fluorescence et le microscope optique ordinaire, le microscope à fluorescence et le microscope optique ordinaire est différent, ce n'est pas par l'éclairage de la source de lumière ordinaire pour observer l'échantillon, mais par l'utilisation d'une certaine longueur d'onde de lumière (généralement ultraviolette, bleu-violet) excitation de l'échantillon sous le microscope à l'intérieur du matériau fluorescent, de sorte qu'il émette une lumière fluorescente, de sorte que le rôle du microscope à fluorescence dans la source de lumière n'est pas un éclairage direct, mais une sorte de stimulation des échantillons de la fluorescence de la lumière intérieure La source du microscope à fluorescence n'est pas une illumination directe, mais une source d'énergie pour stimuler la substance fluorescente à l'intérieur de l'échantillon. La raison pour laquelle nous pouvons observer l'échantillon n'est pas due à l'éclairage de la source lumineuse, mais au phénomène de fluorescence présenté par la substance fluorescente dans l'échantillon après avoir absorbé l'énergie lumineuse excitée. On peut voir que les caractéristiques du microscope à fluorescence sont principalement que sa source de lumière peut fournir un grand nombre de gammes de longueurs d'onde spécifiques de lumière d'excitation, de sorte que les substances fluorescentes présentes dans l'échantillon examiné puissent obtenir l'intensité de lumière d'excitation nécessaire. Dans le même temps, le microscope à fluorescence doit disposer d'un système de filtre correspondant. Le microscope à fluorescence est l'outil de base pour l'histochimie de fluorescence. Il est composé d'une source de lumière ultra-haute pression, d'un système de filtre (y compris une plaque filtrante d'excitation et de suppression), d'un système optique et d'un système photographique et d'autres composants majeurs, consiste à utiliser une certaine longueur d'onde de lumière pour stimuler l'échantillon à émettre de la fluorescence.
1. la méthode d'excitation par fluorescence : selon la plage de longueurs d'onde de la lumière, elle est divisée en méthode d'excitation UV (en utilisant un éclairage ultraviolet) et en méthode d'excitation BV (en utilisant la lumière bleue violette), deux types de méthode d'excitation UV sont plus courts que 400 nm près de la lumière ultraviolette pour excitation. Il n'y a pas de lumière d'excitation visible dans cette méthode, donc la fluorescence observée montre la fluorescence inhérente du colorant, et il est facile de distinguer la fluorescence spécifique sur l'échantillon de l'auto-fluorescence du tissu de fond.
2. Méthode d'excitation BV : La méthode est centrée sur 404 nm, 434 nm de l'ultraviolet à la lumière bleue pour l'excitation. Cette méthode utilise la lumière bleue pour irradier l'échantillon, de sorte que le filtre de coupure du système d'observation de fluorescence doit utiliser un filtre capable de bloquer complètement la lumière bleue et de laisser passer complètement la fluorescence verte et jaune souhaitée. Pigments fluorescents pour la méthode des anticorps fluorescents. Étant donné que la longueur d'onde d'absorption maximale de la lumière d'excitation et la longueur d'onde d'émission maximale de la fluorescence sont proches l'une de l'autre, les filtres utilisés dans la méthode d'excitation BV doivent être des filtres à coupure nette. Cette méthode utilise la lumière bleue comme lumière d’excitation, de sorte que l’efficacité d’absorption du fluorochrome est plus élevée et qu’une image plus lumineuse peut être obtenue. L'inconvénient est que la fluorescence en dessous de 500 nm n'est pas visible et qu'au-dessus de 500 nm, toute l'image apparaît en jaune. Dans la méthode des anticorps fluorescents, la majeure partie de la spécificité est jugée par la couleur unique du fluorochrome, de sorte que les inconvénients de la méthode d’excitation BV décrite ci-dessus ont tendance à être extrêmement influents lorsqu’on discute d’une spécificité subtile.
