Différences entre la microscopie à fluorescence et la microscopie confocale
microscope à fluorescence
1. Le microscope à fluorescence utilise la lumière ultraviolette comme source de lumière pour irradier l'objet inspecté, ce qui lui fait émettre une fluorescence, puis observer la forme et la position de l'objet au microscope. La microscopie à fluorescence est utilisée pour étudier l'absorption, le transport, la distribution et la localisation des substances dans les cellules. Certaines substances dans les cellules, telles que la chlorophylle, peuvent fluorescence lorsqu'elles sont exposées à un rayonnement ultraviolet; Il existe également certaines substances qui ne peuvent pas émettre de fluorescence elles-mêmes, mais peuvent également émettre de la fluorescence si elles sont colorées avec des colorants fluorescents ou des anticorps fluorescents et irradiés avec une lumière ultraviolette. La microscopie à fluorescence est l'un des outils de recherche qualitative et quantitative sur ces substances.
2. Principe du microscope à fluorescence:
(A) Source lumineuse: la source lumineuse émet la lumière de différentes longueurs d'onde (de l'ultraviolet à l'infrarouge).
(B) Filtre d'excitation Source de lumière: transmission de la lumière d'une longueur d'onde spécifique qui peut provoquer une fluorescence dans l'échantillon, tout en bloquant la lumière inutile pour une fluorescence passionnante.
(C) Échantillons fluorescents: généralement colorés avec des pigments fluorescents.
(D) Bloquer un filtre: il transmet sélectivement la fluorescence en bloquant la lumière d'excitation qui n'est pas absorbée par l'échantillon, et certaines longueurs d'onde dans la fluorescence sont également transmises sélectivement. Un microscope qui utilise la lumière ultraviolette comme source de lumière pour faire en sorte que l'objet illuminé émette une fluorescence. Le microscope électronique a été assemblé pour la première fois par Knorr et Haruska à Berlin, en Allemagne en 1931. Ce microscope utilise des faisceaux électroniques à grande vitesse au lieu de faisceaux lumineux. En raison de la longueur d'onde beaucoup plus courte du débit d'électrons par rapport aux ondes lumineuses, le grossissement d'un microscope électronique peut atteindre 8 0} 0000, avec une limite de résolution minimale de 0,2 nanomètre. Le microscope électronique à balayage, qui a été utilisé pour la première fois en 1963, permet aux gens de voir les minuscules structures à la surface des objets.
3. Portée de l'application: utilisée pour agrandir les images de petits objets. Généralement utilisé pour les observations de biologie, de médecine, de particules microscopiques, etc.
microscope confocal
1. Le microscope confocal ajoute une demi-lentille semi-réfléchissante au chemin de lumière réfléchie, qui déville la lumière réfléchie qui a traversé la lentille dans d'autres directions. À son point focal, il y a un déflecteur avec un trou d'épingle situé au point focal, et derrière le déflecteur se trouve un tube photomultiplier. On peut imaginer que la lumière réfléchie avant et après la focalisation de la lumière de détection ne peut pas être concentrée sur le petit trou à travers ce système confocal et sera bloquée par le déflecteur. Le photomètre mesure donc l'intensité lumineuse réfléchie au point focal.
2. Principe: Les microscopes optiques traditionnels utilisent des sources de lumière de champ, et l'image de chaque point sur l'échantillon est affectée par la diffraction ou la lumière diffusée des points voisins; Le microscope confocal à balayage laser utilise un faisceau laser pour éclairer un trou d'épingle et former une source de lumière ponctuelle pour scanner chaque point sur le plan focal de l'échantillon. Le point éclairé sur l'échantillon est imaginé au sténopé de détection, et est reçu point par point ou ligne par un tube photomultiplier (PMT) ou un dispositif de couplage froid (CCCD) après avoir détecté le stérophile, formant rapidement une image de fluorescence sur l'écran du moniteur de l'ordinateur. Le sténopé de l'éclairage et le sténopé de détection sont conjugués par rapport au plan focal de la lentille objective. Les points sur le plan focal sont simultanément axés sur le trou d'échappement et le trou d'émission d'émission, et les points à l'extérieur du plan focal ne seront pas imagés à l'épingle de détection. L'image confocale résultante est la coupe transversale optique de l'échantillon, surmontant l'inconvénient des images floues dans les microscopes généraux.
