Méthode de comptage direct des micro-organismes au microscope
Le comptage microscopique direct à l'aide d'un hémocytomètre est une méthode courante de dénombrement microbien. Cette méthode se caractérise par un fonctionnement intuitif et une détection rapide. Une suspension bactérienne convenablement diluée (ou suspension de spores) est ajoutée à la chambre de comptage entre la lame et la lamelle d'un hémocytomètre pour le comptage microscopique. Le volume de la chambre de comptage étant fixe (0,1 mm³), le nombre total de micro-organismes par unité de volume peut être calculé en fonction du décompte microbien observé au microscope. Comme cette méthode compte à la fois les cellules microbiennes vivantes et mortes, elle est également connue sous le nom de méthode de comptage bactérien total.
Un hémocytomètre est une lame de verre spécialement conçue avec quatre rainures formant trois plates-formes. La plate-forme centrale est divisée en deux moitiés par une courte rainure transversale. Un motif de grille est gravé sur chaque moitié de la plate-forme centrale et chaque grille se compose de neuf grands carrés. Le grand carré central sert de chambre de comptage, où est effectué le comptage microbien. La structure de l'hémocytomètre est illustrée à la figure Ⅷ-1.
Il existe généralement deux spécifications pour la graduation des chambres de comptage. Dans le premier type, un grand carré est divisé en 16 carrés moyens, et chaque carré moyen est ensuite divisé en 25 petits carrés (Figure Ⅷ-2). Dans le deuxième type, un grand carré est divisé en 25 carrés moyens et chaque carré moyen contient 16 petits carrés (Figure Ⅷ-1, C). Quelle que soit la spécification, le nombre total de petits carrés dans un grand carré reste cohérent : 16 × 25=400 petits carrés, comme le montre la figure Ⅷ-2.
Chaque grand carré a une longueur de côté de 1 mm, soit une superficie de 1 mm². Après avoir recouvert d'une lamelle, la hauteur entre la lame et le
la lamelle est de 0,1 mm ; le volume de la chambre de comptage est donc de 0,1 mm³.
Lors du comptage, le nombre total de bactéries dans cinq carrés moyens est généralement compté en premier. Le nombre moyen d'un seul carré moyen est calculé puis multiplié par 16 ou 25 pour obtenir le nombre total de bactéries dans un grand carré. Enfin, le nombre total de microbes par millilitre de suspension bactérienne peut être converti en conséquence.
