Fonctionnement de base du microscope à fluorescence
un. Éteignez les lumières de la pièce et allumez la lampe au mercure du microscope ;
b. Sélectionnez le filtre correspondant en fonction de la fluorescéine marquée par l'échantillon ;
c. Placez l'échantillon et trouvez un champ de vision approprié ;
d. Si vous devez prendre des photos, veuillez confirmer que le film couleur est installé dans l'appareil photo ;
e. Allumez l'appareil Selfie, sélectionnez la vitesse manuelle, généralement la vitesse de prise de vue est de 0.5-10 secondes ;
F. Après utilisation, éteignez toute alimentation et enregistrez l'utilisation. le
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3. Méthode d'enregistrement de l'image de fluorescence
L'image de fluorescence vue par le microscope à fluorescence a à la fois des caractéristiques morphologiques et une couleur et une luminosité de fluorescence. Lors du jugement des résultats, les deux doivent être combinés pour un jugement complet. Les résultats sont enregistrés sur la base d'indicateurs subjectifs, c'est-à-dire l'observation visuelle par les travailleurs. En tant qu'observation qualitative générale, fondamentalement fiable. Avec le développement de la technologie et de la science, des indicateurs objectifs sont utilisés pour enregistrer les résultats de jugement à des degrés divers, tels que les spectrophotomètres cellulaires, les analyseurs d'images et d'autres instruments. Cependant, les résultats enregistrés par ces instruments doivent également être combinés avec des jugements subjectifs. le
La photographie au microscope à fluorescence est très nécessaire pour enregistrer des images de fluorescence. Étant donné que la fluorescence est facile à s'estomper et à s'affaiblir, il est nécessaire d'enregistrer les résultats en temps réel. La méthode est fondamentalement la même que celle de la photomicrographie ordinaire. Juste besoin d'utiliser un film photosensible à grande vitesse. Étant donné que la lumière ultraviolette a un effet important sur l'extinction de la fluorescence, comme les marqueurs FITC, la luminosité de la fluorescence diminuera de 50 % lorsqu'elle est irradiée avec de la lumière ultraviolette pendant 30 secondes. Par conséquent, si la vitesse d'exposition est trop lente, l'image fluorescente ne peut pas être prise. Les microscopes à fluorescence de recherche générale ont des dispositifs de système de photomicrographie semi-automatiques ou entièrement automatiques. le
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4. Précautions d'utilisation de la microscopie à fluorescence
un. Opérez en stricte conformité avec les exigences des instructions d'usine du microscope à fluorescence et ne modifiez pas le programme à volonté. le
b. L'inspection doit être effectuée dans une pièce sombre. Après être entré dans la chambre noire, branchez l'alimentation électrique et allumez la lampe au mercure à ultra-haute pression pendant 5-15 minutes. Une fois que la lumière intense de la source lumineuse est stable, les yeux sont complètement adaptés à la chambre noire, puis commencent à observer le spécimen. le
c. Pour éviter les dommages des rayons ultraviolets aux yeux, portez des lunettes de protection lors du réglage de la source lumineuse. le
d. Le temps d'inspection est de préférence de 1-2 heures à chaque fois. S'il dépasse 90 minutes, l'intensité lumineuse de la lampe au mercure à ultra-haute pression diminuera progressivement et la fluorescence s'affaiblira; après que l'échantillon a été irradié avec de la lumière ultraviolette pendant 3-5 minutes, la fluorescence sera également considérablement affaiblie ; par conséquent, il ne doit pas dépasser 2-3 heures au maximum. . le
e. La durée de vie de la source lumineuse du microscope à fluorescence est limitée et les échantillons doivent être contrôlés de manière centralisée pour gagner du temps et protéger la source lumineuse. Lorsqu'il fait chaud, des ventilateurs doivent être ajoutés pour dissiper la chaleur, et les nouvelles ampoules doivent être enregistrées depuis le début de leur durée d'utilisation. Lorsque vous souhaitez l'utiliser à nouveau après l'extinction de la lampe, vous devez attendre que l'ampoule soit suffisamment refroidie avant de l'allumer. Évitez d'allumer la source lumineuse plusieurs fois par jour. le
F. Observez l'échantillon immédiatement après la coloration, car la fluorescence s'affaiblit progressivement avec le temps. Si l'échantillon est stocké dans un sac en plastique polyéthylène à 4 degrés, le temps d'affaiblissement de la fluorescence peut être retardé et l'agent de montage peut être empêché de s'évaporer. le
g. Norme de jugement de la luminosité de la fluorescence : elle est généralement divisée en quatre niveaux, c'est-à-dire que "-" signifie qu'aucune fluorescence ou une faible fluorescence ne peut être vue. « plus » signifie que seule une fluorescence clairement visible a été observée. " plus plus " signifie qu'une fluorescence brillante est visible. « plus plus plus » signifie une fluorescence brillante visible.
