Les microscopes à fluorescence sont classés en deux types en fonction de leurs chemins optiques :
1. Microscope à fluorescence à transmission : la source de lumière d'excitation est utilisée pour exciter la fluorescence en passant à travers le matériau de l'échantillon à travers une lentille condensatrice. Des concentrateurs de champ sombre couramment utilisés peuvent également être utilisés, et des concentrateurs ordinaires peuvent être utilisés pour ajuster le réflecteur afin de rediriger et de lober latéralement la lumière d'excitation sur l'échantillon. Il s'agit d'un microscope à fluorescence relativement ancien-. Son avantage est une forte fluorescence à faible grossissement, mais son inconvénient est que sa fluorescence diminue avec l'augmentation du grossissement. Il est donc préférable d’observer des échantillons de plus grande taille.
2. Le microscope à fluorescence à lumière tombante est un nouveau type de microscope à fluorescence développé dans les temps modernes. Contrairement à ce qui précède, la lumière d'excitation tombe de la lentille d'objectif vers le bas sur la surface de l'échantillon, en utilisant la même lentille d'objectif que le condenseur d'éclairage et la lentille d'objectif pour collecter la fluorescence. Un séparateur de faisceau bicolore doit être ajouté au chemin optique, qui est à 45 degrés de l'uranium léger. Angle, la lumière d'excitation est réfléchie dans l'objectif et focalisée sur l'échantillon. La fluorescence générée par l'échantillon, ainsi que la lumière d'excitation réfléchie par la surface de la lentille d'objectif et du verre de protection, pénètrent dans la lentille d'objectif et retournent au séparateur de faisceau bicolore, séparant la lumière d'excitation et la fluorescence. La lumière d'excitation résiduelle est ensuite absorbée par le filtre bloquant. Si différentes combinaisons de filtres d'excitation/séparateurs de faisceaux bicolores/filtres de blocage sont utilisées, elles peuvent répondre aux besoins de différents produits de réaction fluorescents. Les avantages de ce microscope à fluorescence sont un éclairage de champ uniforme, une imagerie claire et une fluorescence plus forte avec un grossissement plus important.
(2) Instructions d'utilisation du microscope à fluorescence
1. Allumez la source de lumière. La lampe au mercure à ultra-haute pression doit être préchauffée pendant quelques minutes pour atteindre sa luminosité maximale.
2. La microscopie à fluorescence par transmission nécessite l'installation du filtre d'excitation requis entre la source de la lampe et le condenseur, ainsi que du filtre de blocage correspondant derrière l'objectif. Le microscope à fluorescence à lumière tombante doit insérer le filtre d'excitation/séparateur de faisceau double couleur/bloc de filtre de blocage requis dans la fente du chemin optique.
3. Observez avec un microscope de faible-puissance et ajustez le centre de la source lumineuse en fonction du dispositif de réglage des différents types de microscopes à fluorescence, de sorte qu'elle soit située au centre de tout le point d'éclairage.
4. Placez l'échantillon et concentrez-le pour l'observation. Une attention particulière doit être portée lors de l'utilisation : n'observez pas directement avec vos yeux avant d'installer le filtre pour éviter des dommages oculaires ; Lors de l'observation d'échantillons avec un microscope à huile, un microscope à huile spécial non fluorescent doit être utilisé ; Une fois la lampe au mercure haute-pression éteinte, elle ne peut pas être rallumée immédiatement. Le redémarrage prend 5 minutes, sinon cela sera instable et affectera la durée de vie de la lampe au mercure.
(3) En observant au microscope à fluorescence sur une plate-forme d'enseignement utilisant un filtre de lumière bleu violet, des cellules colorées avec un colorant fluorescent orange à 0,01 % d'acridine peuvent être observées. Le noyau et le cytoplasme sont excités pour produire deux couleurs de fluorescence différentes (vert foncé et rouge orange).
